| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第10-11页 |
| 引言 | 第11-13页 |
| 文献综述 | 第13-25页 |
| 1 斑马鱼研究进展 | 第13-15页 |
| 1.1 模式生物斑马鱼简介 | 第13页 |
| 1.2 斑马鱼研究历史 | 第13-14页 |
| 1.3 斑马鱼在人类疾病研究中的应用 | 第14-15页 |
| 2 CRISPR/Cas9系统研究进展 | 第15-23页 |
| 2.1 CRISPR/Cas9系统简介 | 第15-18页 |
| 2.1.1 CRISPR/Cas系统研究历史 | 第15-16页 |
| 2.1.2 CRISPR/Cas9系统简介 | 第16-18页 |
| 2.2 CRISPR/Cas9系统介导的基因敲除 | 第18-19页 |
| 2.3 CRISPR/Cas9系统介导的基因敲入 | 第19-20页 |
| 2.4 CRISPR/Cas9系统介导的基因调控 | 第20-22页 |
| 2.5 CRISPR/Cas9系统与其它基因编辑技术的比较 | 第22-23页 |
| 3 本研究的立题依据及研究意义 | 第23-24页 |
| 3.1 初步探究Nondret002679表达规律及其启动子区敲除 | 第23页 |
| 3.2 dCas9斑马鱼模型的构建 | 第23-24页 |
| 4 研究展望 | 第24-25页 |
| 第一章 探究Nondret002679在斑马鱼胚胎各阶段及各组织的表达规律 | 第25-34页 |
| 前言 | 第25页 |
| 1 材料与方法 | 第25-31页 |
| 1.1 试验试剂 | 第25-26页 |
| 1.2 实验仪器 | 第26页 |
| 1.3 试验动物 | 第26页 |
| 1.4 斑马鱼胚胎的各阶段以及各组织中Nondret002679表达量的差异分析 | 第26-31页 |
| 1.4.0 各阶段斑马鱼胚胎的收集 | 第27页 |
| 1.4.1 成年斑马鱼的解剖 | 第27-28页 |
| 1.4.2 采用TRIzoL试剂提取胚胎中的总RNA | 第28页 |
| 1.4.3 RNA浓度的检测 | 第28-29页 |
| 1.4.4 逆转录合成cDNA | 第29-30页 |
| 1.4.5 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测 | 第30-31页 |
| 1.4.6 统计学处理 | 第31页 |
| 2 结果与分析 | 第31-32页 |
| 2.1 Nondret002679在斑马鱼胚胎各阶段表达量的差异分析 | 第31-32页 |
| 2.2 Nondret002679在斑马鱼的各组织中表达量的差异分析 | 第32页 |
| 3 讨论 | 第32-34页 |
| 第二章 CRISPR/Cas9系统介导的Nondret002679启动子区敲除 | 第34-45页 |
| 前言 | 第34页 |
| 1 材料与方法 | 第34-40页 |
| 1.1 实验仪器 | 第35页 |
| 1.2 试验试剂 | 第35页 |
| 1.3 Nondret002679靶位点的选择 | 第35-36页 |
| 1.4 gRNA体外转录模板的合成及转录 | 第36页 |
| 1.4.1 gRNA体外转录模板的合成 | 第36页 |
| 1.4.2 gRNA的体外转录 | 第36页 |
| 1.5 Cas9 mRNA体外转录 | 第36-37页 |
| 1.6 显微注射及敲除鉴定 | 第37-39页 |
| 1.6.1 显微注射 | 第37-38页 |
| 1.6.2 斑马鱼DNA的提取 | 第38-39页 |
| 1.6.3 Nondret002679启动子区敲除鉴定 | 第39页 |
| 1.7 启动子区缺失的斑马鱼的纯合鉴定 | 第39页 |
| 1.8 启动子区敲除的杂合斑马鱼Nondret002679的表达分析 | 第39-40页 |
| 2 结果 | 第40-43页 |
| 2.1 早期斑马鱼敲除鉴定结果 | 第40页 |
| 2.2 2月龄斑马鱼敲除鉴定结果 | 第40页 |
| 2.3 启动子区缺失的纯合斑马鱼的获得 | 第40-41页 |
| 2.4 启动子区敲除的杂合斑马鱼Nondret002679的表达分析结果 | 第41-43页 |
| 3 讨论 | 第43-45页 |
| 第三章 CRISPR/Cas9系统介导的dCas9定点敲入斑马鱼基因组模型的构建 | 第45-54页 |
| 前言 | 第45-46页 |
| 1 材料与方法 | 第46-50页 |
| 1.1 材料 | 第46页 |
| 1.2 仪器设备 | 第46-47页 |
| 1.3 dCas9 donor载体构建引物的设计与合成 | 第47页 |
| 1.4 dCas9 donor载体的构建 | 第47-48页 |
| 1.5 靶位点的选择 | 第48-49页 |
| 1.6 显微注射及敲入鉴定 | 第49页 |
| 1.7 杂合斑马鱼的dCas9的表达分析 | 第49-50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-52页 |
| 2.1 dCas9敲入斑马鱼基因组的鉴定结果 | 第50页 |
| 2.2 纯合dCas9斑马鱼鉴定结果 | 第50-51页 |
| 2.3 杂合斑马鱼的dCas9表达分析结果 | 第51-52页 |
| 3 讨论 | 第52-54页 |
| 全文结论 | 第54页 |
| 参考文献 | 第54-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 攻读学位期间发表学术论文 | 第67-68页 |
