| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 符号或缩略词说明 | 第8-9页 |
| 前言 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-19页 |
| 1.1 基因组编辑技术的发展介绍 | 第10-11页 |
| 1.1.1 基因组编辑技术的应用现状 | 第10页 |
| 1.1.2 人工核酸酶介导的基因组编辑 | 第10-11页 |
| 1.1.3 基因组编辑技术在植物中的应用问题 | 第11页 |
| 1.2 CRISPR/Cas简述 | 第11-12页 |
| 1.2.1 CRISPR的研究历史 | 第11-12页 |
| 1.2.2 CRISPR/Cas技术进行基因编辑的基本原理 | 第12页 |
| 1.3 CRISPR/Cas系统的特点 | 第12-14页 |
| 1.3.1 CRISPR/Cas的基因结构 | 第13页 |
| 1.3.2 CRISPR/Cas的技术结构 | 第13-14页 |
| 1.4 CRISPR/Cas9系统的应用 | 第14-15页 |
| 1.4.1 CRISPR/Cas9系统在鱼类中的应用 | 第14页 |
| 1.4.2 CRISPR/Cas9系统在老鼠中的应用 | 第14页 |
| 1.4.3 CRISPR/Cas9系统在植物中的应用 | 第14-15页 |
| 1.5 病毒诱导的基因沉默 | 第15-17页 |
| 1.5.1 病毒诱导基因沉默（VIGS）的发现 | 第15页 |
| 1.5.2 RNA病毒诱导的基因沉默 | 第15页 |
| 1.5.3 其他病毒诱导的基因沉默 | 第15-16页 |
| 1.5.4 VIGS病毒载体的应用 | 第16页 |
| 1.5.5 病毒诱导基因沉默（VIGS）的优缺点 | 第16-17页 |
| 1.6 本项目的目的和意义 | 第17-19页 |
| 第二章 材料和方法 | 第19-35页 |
| 2.1 材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第19页 |
| 2.1.2 实验试剂和菌株 | 第19-20页 |
| 2.2 病毒介导crRNA在遍在表达Cas9蛋白的烟草转基因系中编辑 | 第20-28页 |
| 2.2.1 PDS基因靶点序列设计 | 第20页 |
| 2.2.2 crRNA的构建 | 第20-22页 |
| 2.2.3 PEBV载体的处理 | 第22-24页 |
| 2.2.4 单酶切pCAPE2-GFP质粒和酶切后的crRNA片段进行连接 | 第24页 |
| 2.2.5 链接产物做DH5α（E.coli细胞 ）转化 | 第24页 |
| 2.2.6 重组克隆的筛选 | 第24-26页 |
| 2.2.7 质粒的提取与转化 | 第26-28页 |
| 2.2.7.1 质粒的提取和纯度测量 | 第26-27页 |
| 2.2.7.2 农杆菌的转化 | 第27页 |
| 2.2.7.3 培养保存转化好的农杆菌 | 第27-28页 |
| 2.2.8 获得遍在表达Cas9蛋白转基因系用pCAPE2：crRNA注射侵染 | 第28页 |
| 2.3 病毒介导Cas9和crRNA在烟草中编辑 | 第28-31页 |
| 2.3.1 Cas9和crRNA片段的获得 | 第28-29页 |
| 2.3.2 Cas9和crRNA的片段的酶切 | 第29-30页 |
| 2.3.3 对pCAPE2-GFP载体的双酶切 | 第30页 |
| 2.3.4 pCAPE2：Cas9-crRNA载体片段的拼接 | 第30页 |
| 2.3.5 pCAPE2：Cas9-crRNA病毒载体的注射 | 第30-31页 |
| 2.3.6 表型分析 | 第31页 |
| 2.4 病毒介导crRNA在配子特异表达Cas9蛋白的转基因系中编辑 | 第31-35页 |
| 2.4.1 NtDMC1启动子的处理 | 第31-33页 |
| 2.4.2 Cas9蛋白的整合 | 第33-35页 |
| 2.4.2.1 BP反应 | 第33-34页 |
| 2.4.2.2 LR反应 | 第34-35页 |
| 第三章 实验结果 | 第35-46页 |
| 3.1 病毒介导crRNA在遍在表达Cas9基因的烟草转基因系中的编辑结果 | 第35-38页 |
| 3.1.1 crRNA的构建 | 第35-36页 |
| 3.1.2 pCAPE2-GFP的单酶切和双酶切结果 | 第36页 |
| 3.1.3 pCAPE2:crRNA载体验证及其转化检测 | 第36-37页 |
| 3.1.4 遍在表达Cas9基因的烟草转基因系的构建 | 第37页 |
| 3.1.5 病毒载体pCAPE2：crRNA对遍在表达Cas9株系侵染 | 第37-38页 |
| 3.2 病毒介导Cas9和crRNA在烟草中的编辑结果 | 第38-44页 |
| 3.2.1 Cas9和crRNA片段的扩增结果 | 第38-39页 |
| 3.2.2 连接转化DH5α，质粒提取 | 第39页 |
| 3.2.3 质粒农杆菌转化结果 | 第39-40页 |
| 3.2.4 无菌苗注射后的表型分析 | 第40-41页 |
| 3.2.5 基因组编辑序列的检验 | 第41-44页 |
| 3.3 病毒介导crRNA在配子特异表达Cas9转基因系中的编辑结果 | 第44-46页 |
| 3.3.1 获得NtDMC1的片段 | 第44-45页 |
| 3.3.2 将Cas9基因转移到入门载体 | 第45页 |
| 3.3.3 pH7WG:NtDMC1：Cas9载体的构建验证 | 第45-46页 |
| 第四章 讨论 | 第46-48页 |
| 4.1 CRISPR/Cas9系统介导的突变效率影响因素 | 第46-47页 |
| 4.2 CRISPR/Cas9系统介导的基因组定点编辑的特异性 | 第47-48页 |
| 第五章 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 个人简历 | 第56页 |
