| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-18页 |
| 1.1 病原学 | 第12页 |
| 1.2 猪传染性胃肠炎病毒基因组的结构及功能 | 第12-14页 |
| 1.2.1 猪传染性胃肠炎病毒基因组的结构 | 第12页 |
| 1.2.2 结构基因与其编码蛋白的功能 | 第12-13页 |
| 1.2.3 非结构基因与其编码蛋白的功能 | 第13-14页 |
| 1.3 猪传染性胃肠炎病毒的诊断 | 第14-17页 |
| 1.3.1 传统的病原学检测 | 第14页 |
| 1.3.2 血清学检测 | 第14-15页 |
| 1.3.3 分子生物学诊断技术 | 第15-17页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第17-18页 |
| 第二章 猪传染性胃肠炎病毒的分离与鉴定 | 第18-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-19页 |
| 2.1.1 病料 | 第18页 |
| 2.1.2 细胞 | 第18页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第18页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-23页 |
| 2.2.1 临床病料的处理 | 第19页 |
| 2.2.2 临床病料的胶体金试纸条鉴定 | 第19页 |
| 2.2.3 临床病料的RT-PCR鉴定 | 第19-20页 |
| 2.2.4 病毒的分离 | 第20页 |
| 2.2.5 病毒含量的测定 | 第20页 |
| 2.2.6 病毒的纯净性鉴定 | 第20页 |
| 2.2.7 病毒的特异性鉴定 | 第20-21页 |
| 2.2.8 病毒全基因组序列的测定 | 第21-23页 |
| 2.2.9 序列的拼接与分析 | 第23页 |
| 2.3 结果 | 第23-28页 |
| 2.3.1 临床病料的胶体金鉴定 | 第23页 |
| 2.3.2 临床病料的RT-PCR鉴定 | 第23-24页 |
| 2.3.3 病毒的分离 | 第24页 |
| 2.3.4 病毒的传代与TCID_(50)测定 | 第24-25页 |
| 2.3.5 纯净性检验结果 | 第25页 |
| 2.3.6 病毒中和实验 | 第25页 |
| 2.3.7 TGEV直接免疫荧光观察 | 第25-26页 |
| 2.3.8 全基因组序列测定 | 第26-28页 |
| 2.4 讨论 | 第28页 |
| 2.4.1 病料样品的鉴定 | 第28页 |
| 2.4.2 病毒的分离培养 | 第28页 |
| 2.5 小结 | 第28-29页 |
| 第三章 猪传染性胃肠炎病毒抗体ELISA检测方法的建立 | 第29-38页 |
| 3.1 实验材料 | 第29页 |
| 3.1.1 细胞、毒株和血清 | 第29页 |
| 3.1.2 主要试剂与耗材 | 第29页 |
| 3.2 实验方法 | 第29-32页 |
| 3.2.1 猪传染性胃肠炎抗原的制备 | 第29-30页 |
| 3.2.2 间接ELISA方法的建立及条件优化 | 第30-31页 |
| 3.2.3 敏感性试验 | 第31页 |
| 3.2.4 特异性试验 | 第31页 |
| 3.2.5 重复性试验 | 第31-32页 |
| 3.2.6 与市售试剂盒的符合率试验 | 第32页 |
| 3.3 结果 | 第32-37页 |
| 3.3.1 抗原的制备 | 第32页 |
| 3.3.2 间接ELISA方法的建立及条件优化 | 第32-35页 |
| 3.3.3 敏感性试验 | 第35页 |
| 3.3.4 特异性试验 | 第35-36页 |
| 3.3.5 重复性试验 | 第36页 |
| 3.3.6 与市售试剂盒的符合率试验 | 第36-37页 |
| 3.4 讨论 | 第37页 |
| 3.5 小结 | 第37-38页 |
| 第四章 猪传染性胃肠炎病毒N蛋白的原核表达及鉴定 | 第38-46页 |
| 4.1 试验材料 | 第38页 |
| 4.1.1 菌种、载体和血清 | 第38页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第38页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第38页 |
| 4.2 试验方法 | 第38-42页 |
| 4.2.1 引物设计 | 第38-39页 |
| 4.2.2 基因的扩增与克隆 | 第39页 |
| 4.2.3 重组表达质粒的构建 | 第39-40页 |
| 4.2.4 重组N蛋白的诱导表达和鉴定 | 第40-42页 |
| 4.3 结果 | 第42-45页 |
| 4.3.1 N基因的扩增 | 第42页 |
| 4.3.2 重组表达质粒pET-28a-N的鉴定 | 第42页 |
| 4.3.3 重组表达载体基因序列的测定 | 第42-43页 |
| 4.3.4 重组N蛋白的诱导表达 | 第43页 |
| 4.3.5 重组N蛋白诱导时间和温度的优化 | 第43-44页 |
| 4.3.6 重组N蛋白抗原性分析 | 第44-45页 |
| 4.4 讨论 | 第45页 |
| 4.5 小结 | 第45-46页 |
| 第五章 TGEV N蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 | 第46-55页 |
| 5.1 试验材料 | 第46页 |
| 5.1.1 细胞与动物 | 第46页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第46页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第46页 |
| 5.2 试验方法 | 第46-49页 |
| 5.2.1 重组N蛋白的纯化与鉴定 | 第46-47页 |
| 5.2.2 N蛋白单克隆抗体的制备 | 第47-49页 |
| 5.2.3 单克隆抗体的大量制备与纯化 | 第49页 |
| 5.3 结果 | 第49-54页 |
| 5.3.1 重组N蛋白的纯化和鉴定 | 第49-50页 |
| 5.3.2 杂交瘤细胞的筛选 | 第50页 |
| 5.3.3 杂交瘤细胞的鉴定 | 第50-51页 |
| 5.3.4 纯化后单克隆抗体的鉴定 | 第51-52页 |
| 5.3.5 ELISA检测抗体的亲和常数 | 第52-54页 |
| 5.4 讨论 | 第54页 |
| 5.5 小结 | 第54-55页 |
| 第六章 猪传染性胃肠炎病毒胶体金免疫层析试纸条的研制 | 第55-68页 |
| 6.1 试验材料 | 第55页 |
| 6.1.1 病毒与细菌 | 第55页 |
| 6.1.2 主要试剂 | 第55页 |
| 6.1.3 试纸条材料 | 第55页 |
| 6.1.4 主要仪器 | 第55页 |
| 6.2 试验方法 | 第55-59页 |
| 6.2.1 胶体金颗粒的制备与鉴定 | 第55-56页 |
| 6.2.2 胶体金标记鼠抗猪传染性胃肠炎病毒单克隆抗体的制备 | 第56-57页 |
| 6.2.3 猪传染性胃肠炎病毒快速检测试纸条卡的组装 | 第57页 |
| 6.2.4 猪传染性胃肠炎病毒快速检测试纸卡的优化 | 第57-58页 |
| 6.2.5 猪传染性胃肠炎病毒快速检测试纸卡的性能测定 | 第58-59页 |
| 6.2.6 临床试验的符合率试验 | 第59页 |
| 6.3 实验结果 | 第59-66页 |
| 6.3.1 胶体金的制备与鉴定 | 第59-60页 |
| 6.3.2 胶体金标记抗猪传染性胃肠炎病毒单克隆抗体的标记条件 | 第60-61页 |
| 6.3.3 猪传染性胃肠炎病毒快速检测试纸卡检测体系的组装 | 第61页 |
| 6.3.4 猪传染性胃肠炎病毒快速检测试纸卡各的优化 | 第61-63页 |
| 6.3.5 猪传染性胃肠炎病毒快速检测试纸卡的性能测定 | 第63-66页 |
| 6.4 讨论 | 第66-67页 |
| 6.4.1 胶体金的制备与标记的确定 | 第66-67页 |
| 6.4.2 膜包被条件的优化 | 第67页 |
| 6.5 小结 | 第67-68页 |
| 第七章 结论 | 第68-69页 |
| 第八章 对本研究的进一步设想 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 作者简历 | 第77页 |
