| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 符号说明 | 第9-16页 |
| 第1章 绪论 | 第16-37页 |
| 1.1 天然免疫抗病毒信号及模式识别受体 | 第16-25页 |
| 1.1.1 Toll样模式识别受体 | 第16-18页 |
| 1.1.2 RIG-I样模式识别受体 | 第18-21页 |
| 1.1.3 NOD样模式识别受体 | 第21-23页 |
| 1.1.4 DNA感受器 | 第23-25页 |
| 1.2 RIG-I样模式识别受体活化及调控机制 | 第25-29页 |
| 1.2.1 RIG-I活化及调控机制 | 第25-27页 |
| 1.2.2 MDA-5活化及调控机制 | 第27-29页 |
| 1.3 TRIM蛋白家族概述 | 第29-37页 |
| 1.3.1 TRIM蛋白家族结构及分类 | 第29-31页 |
| 1.3.2 TRIM家族蛋白功能及与天然免疫抗病毒信号的关系 | 第31-34页 |
| 1.3.3 TRIM65功能研究进展 | 第34-37页 |
| 第2章 材料与方法 | 第37-69页 |
| 2.1 实验材料 | 第37-41页 |
| 2.1.1 小鼠 | 第37页 |
| 2.1.2 细胞系 | 第37页 |
| 2.1.3 病毒 | 第37-38页 |
| 2.1.4 shRNA | 第38页 |
| 2.1.5 QPCR引物 | 第38页 |
| 2.1.6 质粒 | 第38-39页 |
| 2.1.7 质粒构建用引物 | 第39-41页 |
| 2.2 实验试剂及耗材 | 第41-46页 |
| 2.2.1 抗体 | 第41-42页 |
| 2.2.2 实验相关试剂 | 第42-44页 |
| 2.2.3 各溶液配制方法 | 第44页 |
| 2.2.4 实验相关耗材 | 第44-45页 |
| 2.2.5 实验仪器 | 第45-46页 |
| 2.3 实验方法 | 第46-69页 |
| 2.3.1 细胞培养及传代 | 第46-47页 |
| 2.3.2 细胞冻存 | 第47页 |
| 2.3.3 细胞复苏 | 第47-48页 |
| 2.3.4 L929细胞上清的收集 | 第48页 |
| 2.3.5 小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDMs)的分离和培养 | 第48-49页 |
| 2.3.6 BMDM细胞刺激 | 第49-50页 |
| 2.3.7 THP-1细胞分化 | 第50页 |
| 2.3.8 人源细胞系刺激 | 第50-51页 |
| 2.3.9 MEFs细胞获取及刺激 | 第51-52页 |
| 2.3.10 Trim65-/-MEF细胞GFP-TRIM65表达补回 | 第52-53页 |
| 2.3.11 稳定敲低TRIM65表达的Hela细胞系构建 | 第53页 |
| 2.3.12 293-Flag-TRIM65稳转细胞系构建 | 第53-54页 |
| 2.3.13 病毒RNA获取 | 第54页 |
| 2.3.14 Western blot | 第54-55页 |
| 2.3.15 QPCR检测 | 第55-57页 |
| 2.3.16 ELISA | 第57页 |
| 2.3.17 免疫共沉淀 | 第57-58页 |
| 2.3.18 IFN-β双荧光报告基因检测 | 第58-59页 |
| 2.3.19 质粒提取 | 第59页 |
| 2.3.20 质粒转化、涂板及筛选培养 | 第59-60页 |
| 2.3.21 激光共聚焦 | 第60页 |
| 2.3.22 SDD-AGE | 第60-61页 |
| 2.3.23 质粒构建 | 第61-63页 |
| 2.3.24 体外泛素化检测 | 第63页 |
| 2.3.25 病毒扩培及滴度测定 | 第63-65页 |
| 2.3.26 缺陷小鼠测型 | 第65-66页 |
| 2.3.27 小鼠病毒感染 | 第66页 |
| 2.3.28 小鼠血清收取 | 第66-67页 |
| 2.3.29 小鼠生存率统计 | 第67页 |
| 2.3.30 小鼠组织损伤检测 | 第67-68页 |
| 2.3.31 统计学显著性分析 | 第68-69页 |
| 第3章 实验结果 | 第69-93页 |
| 3.1 引言 | 第69-70页 |
| 3.2 实验结果 | 第70-90页 |
| 3.2.1 过表达的TRIM65与MDA-5存在特异性相互作用 | 第70-71页 |
| 3.2.2 TRIM65通过SPRY结构域与MDA-5的Helicase结构域发生相互作用 | 第71-72页 |
| 3.2.3 TRIM65在RNA病毒诱导的MDA-5抗病毒信号活化过程中的重要作用 | 第72-75页 |
| 3.2.4 TRIM65在dsRNA诱导的MDA-5抗病毒信号活化过程中的关键作用 | 第75-78页 |
| 3.2.5 补回TRIM65表达能够恢复Trim65缺陷对MDA-5信号活化的抑制作用 | 第78-79页 |
| 3.2.6 Trim65缺陷对STING、TLR3、TLR4信号的活化没有显著影响 | 第79页 |
| 3.2.7 TRIM65对于人源细胞中MDA-5信号的活化同样有着重要的作用 | 第79-81页 |
| 3.2.8 TRIM65能够促进MDA-5泛素化的发生 | 第81-83页 |
| 3.2.9 TRIM65能够促进MDA-5发生K63连接方式的泛素化修饰 | 第83-84页 |
| 3.2.10 TRIM65诱导了MDA-5-743位赖氨酸发生泛素化修饰 | 第84-85页 |
| 3.2.11 TRIM65介导的MDA-5的泛素化促进了MDA-5寡聚化的发生 | 第85-88页 |
| 3.2.12 TRIM65对于宿主个体抵抗EMCV的感染是至关重要的 | 第88-90页 |
| 3.3 小结与讨论 | 第90-93页 |
| 参考文献 | 第93-105页 |
| 致谢 | 第105-107页 |
| 攻读博士期间的主要研究成果 | 第107页 |
