| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| 1 背景 | 第12-14页 |
| 1.1 养猪业产业价值巨大 | 第12页 |
| 1.2 人工授精技术促进养猪业的发展 | 第12页 |
| 1.3 公猪精液是病原体的传播媒介 | 第12-13页 |
| 1.4 PCV_2、PRV和PPV病毒在公猪精液中的检测 | 第13-14页 |
| 2 PCV_2、PRV和PPV病毒 | 第14-16页 |
| 2.1 猪圆环病毒 | 第14-15页 |
| 2.2 猪伪狂犬病毒 | 第15-16页 |
| 2.3 猪细小病毒 | 第16页 |
| 3 实时荧光定量PCR技术 | 第16-19页 |
| 3.1 实时荧光定量PCR的原理 | 第16-17页 |
| 3.2 实时荧光定量PCR的检测方法 | 第17-18页 |
| 3.3 实时荧光定量PCR的定量方法 | 第18-19页 |
| 3.4 实时荧光定量PCR的优势 | 第19页 |
| 4 研究目的及意义 | 第19-20页 |
| 第二章 PRV SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法的构建及应用 | 第20-34页 |
| 1 实验材料 | 第20-21页 |
| 1.1 实验毒株 | 第20页 |
| 1.2 实验试剂 | 第20-21页 |
| 1.3 主要设备 | 第21页 |
| 1.4 公猪精液样品 | 第21页 |
| 2 实验方法 | 第21-26页 |
| 2.1 核酸提取 | 第21-22页 |
| 2.2 构建重组质粒 | 第22-25页 |
| 2.3 SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法的建立 | 第25-26页 |
| 3 实验结果 | 第26-31页 |
| 3.1 构建重组质粒 | 第26-28页 |
| 3.2 SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法的建立 | 第28-31页 |
| 3.3 临床样品检测结果 | 第31页 |
| 4 讨论 | 第31-34页 |
| 第三章 PCV_2、PPV TaqMan荧光定量PCR方法的构建与应用 | 第34-46页 |
| 1 材料 | 第34-35页 |
| 1.1 病毒和疫苗 | 第34页 |
| 1.2 主要试剂和仪器 | 第34页 |
| 1.3 公猪精液样品 | 第34-35页 |
| 2 方法 | 第35-36页 |
| 2.1 引物的设计 | 第35页 |
| 2.2 人工带毒公猪精液的制备 | 第35页 |
| 2.3 核酸模板的制备 | 第35页 |
| 2.4 标准重组质粒的制备 | 第35页 |
| 2.5 TaqMan荧光定量PCR方法的构建 | 第35-36页 |
| 2.6 临床样品检测 | 第36页 |
| 3 结果 | 第36-43页 |
| 3.1 PCV_2和PPV病毒引物和探针设计结果 | 第36-37页 |
| 3.2 阳性标准品的制备 | 第37-39页 |
| 3.3 TaqMan荧光定量PCR方法的建立 | 第39-43页 |
| 3.4 临床样品检测结果 | 第43页 |
| 4 讨论 | 第43-46页 |
| 第四章 猪圆环病毒2型内标荧光定量PCR检测方法的建立 | 第46-64页 |
| 1 材料 | 第46页 |
| 1.1 病毒和疫苗 | 第46页 |
| 1.2 主要试剂和仪器 | 第46页 |
| 1.3 公猪精液样品 | 第46页 |
| 2 方法 | 第46-51页 |
| 2.1 引物的设计 | 第46-47页 |
| 2.2 人工带毒公猪精液的制备 | 第47-48页 |
| 2.3 核酸模板的制备 | 第48页 |
| 2.4 目标重组质粒的构建 | 第48页 |
| 2.5 内标重组质粒的制备 | 第48页 |
| 2.6 重组质粒的测序及浓度测定 | 第48页 |
| 2.7 单重PCV_2 TaqMan荧光定量PCR检测方法的构建 | 第48-49页 |
| 2.8 含内标扩增体系的PCV_2内标TaqMan荧光定量PCR的构建 | 第49-50页 |
| 2.9 临床样品检测 | 第50-51页 |
| 3 结果 | 第51-60页 |
| 3.1 目标阳性标准品的制备 | 第51-52页 |
| 3.2 内标阳性标准品的制备 | 第52-53页 |
| 3.3 含内标双探针扩增体系的PCV_2内标TaqMan荧光定量PCR的构建 | 第53-59页 |
| 3.4 临床样品检测结果 | 第59-60页 |
| 4 讨论 | 第60-64页 |
| 第五章 猪精液样品的检测与分析 | 第64-74页 |
| 1 材料 | 第64页 |
| 1.1 实验试剂和仪器 | 第64页 |
| 1.2 精液样品 | 第64页 |
| 2 方法 | 第64-65页 |
| 2.1 公猪精液中病毒DNA提取方法的优化 | 第64-65页 |
| 2.2 临床样品的检测 | 第65页 |
| 3 结果 | 第65-69页 |
| 3.1 公猪精液中病毒DNA的提取 | 第65-66页 |
| 3.2 临床精液样品的检测 | 第66-69页 |
| 4 讨论 | 第69-74页 |
| 第六章 结论 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-80页 |
| 附录 | 第80-84页 |
| 致谢 | 第84-86页 |
| 作者简介 | 第86页 |
