英文缩略词简表 | 第1-8页 |
摘要 | 第8-10页 |
Abstract | 第10-12页 |
第一章 文献综述 | 第12-20页 |
·肾脏的结构与发育 | 第12-16页 |
·肾脏的基本结构 | 第12页 |
·肾脏的形态建成 | 第12-13页 |
·肾脏发生的基因调控 | 第13-16页 |
·肾脏的主要生理功能 | 第16页 |
·肾脏相关的疾病 | 第16-17页 |
·多囊肾病(Polycystic Kidney Disease,PKD) | 第16-17页 |
·肾消耗病(Nephronophthisis,NPHP) | 第17页 |
·足细胞病(Podocytopathies) | 第17页 |
·ENU诱变及正向遗传筛选 | 第17-20页 |
第二章 引言 | 第20-22页 |
第三章 材料与方法 | 第22-40页 |
·斑马鱼的饲养 | 第22页 |
·主要实验材料、仪器、试剂及耗材 | 第22-27页 |
·实验仪器 | 第22页 |
·材料与耗材 | 第22-23页 |
·主要试剂及其配制 | 第23-27页 |
·实验方法 | 第27-40页 |
·斑马鱼基因组DNA的简单提取(Na OH裂解法) | 第27-28页 |
·斑马鱼基因组DNA的简单提取(NP40裂解法) | 第28页 |
·Taq DNA聚合酶的制备 | 第28页 |
·DH5α感受态细胞的制备(MgCl2法) | 第28页 |
·斑马鱼总RNA的提取 | 第28-29页 |
·斑马鱼cDNA第一链的合成 | 第29-30页 |
·重组质粒的构建 | 第30-32页 |
·mRNA的体外合成与纯化 | 第32-34页 |
·RNA探针的制备 | 第34页 |
·斑马鱼全胚原位杂交(Whole Mount in situ Hybridization) | 第34-36页 |
·碱性磷酸酶(AP)底物染色 | 第36页 |
·斑马鱼胚胎的显微注射 | 第36-37页 |
·PCR法引入点突变 | 第37页 |
·斑马鱼正向遗传筛选 | 第37-38页 |
·突变基因的图位克隆(positional cloning) | 第38-40页 |
第四章 实验结果与分析 | 第40-56页 |
·斑马鱼前肾突变体遗传筛选结果 | 第40-43页 |
·ENU诱变及F2家系的建立与筛选 | 第40页 |
·F3代的筛选及传代 | 第40页 |
·F4代筛选结果 | 第40-41页 |
·F4突变体的表型分类 | 第41页 |
·部分F4代突变体家系肾小球形态 | 第41-43页 |
·L27突变体表型分析及图位克隆 | 第43-50页 |
·L27突变体表型分析 | 第43-48页 |
·L27突变基因的鉴定 | 第48-50页 |
·lhx1a在斑马鱼前肾发育中的功能 | 第50-56页 |
·lhx1a的时空表达模式 | 第50页 |
·lhx1a缺失对斑马鱼前肾发育的影响 | 第50-53页 |
·体外注射lhx1a mRNA不能挽救lhx1a-/-胚胎表型 | 第53-56页 |
第五章 结论 | 第56-58页 |
·斑马鱼前肾突变体的遗传筛选 | 第56页 |
·lhx1a在斑马鱼前肾发育中的功能 | 第56-58页 |
第六章 讨论 | 第58-62页 |
·正向遗传筛选的优势及我们遇到的问题 | 第58-59页 |
·图位克隆中遇到的问题 | 第59页 |
·lhx1a在前肾发育中的功能 | 第59-62页 |
参考文献 | 第62-66页 |
附录 | 第66-80页 |
致谢 | 第80-82页 |
在读期间发表论文及参与课题 | 第82页 |