| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 目录 | 第5-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-16页 |
| ·谷氨酸棒状杆菌中质粒载体概述 | 第7-9页 |
| ·克隆载体 cloning vector | 第7-8页 |
| ·启动子探测载体 promoter-probe vector | 第8页 |
| ·表达载体 expression vector | 第8-9页 |
| ·替代抗生素筛选系统研究概况 | 第9-11页 |
| ·Post Segregational Killing 系统 | 第9页 |
| ·Operator-Repressor Titration 系统 | 第9-10页 |
| ·Auxotrophy Complementation 系统 | 第10-11页 |
| ·C. glutamicum 中基因敲除系统概述 | 第11-13页 |
| ·C. glutamicum 中 L-缬氨酸的合成概述 | 第13-14页 |
| ·L-缬氨酸生物合成途径 | 第13-14页 |
| ·国内外 C. glutamicum L-缬氨酸生产菌株现状 | 第14页 |
| ·本研究立题依据和意义 | 第14-15页 |
| ·本研究主要研究内容 | 第15-16页 |
| 第二章 材料和方法 | 第16-31页 |
| ·实验材料 | 第16-19页 |
| ·培养基及培养条件 | 第16页 |
| ·菌株、质粒及引物 | 第16-19页 |
| ·主要仪器 | 第19页 |
| ·实验方法 | 第19-21页 |
| ·基因组 DNA 及质粒提取 | 第19-20页 |
| ·PCR 反应体系及条件 | 第20页 |
| ·寡核苷酸退火连接 | 第20页 |
| ·质粒和 PCR 产物的酶切连接 | 第20页 |
| ·感受态细胞的制备及质粒转化 | 第20-21页 |
| ·大肠杆菌-谷氨酸棒状杆菌穿梭型新型表达系统的构建 | 第21-25页 |
| ·表达载体 pJYW-4 及 pJYW-5 的构建 | 第21-24页 |
| ·敲除质粒 pJYW-6 的构建 | 第24-25页 |
| ·C. glutamicum 中基因连续敲除系统的构建 | 第25-27页 |
| ·温敏质粒 pDTW109 的构建 | 第25-26页 |
| ·kan 盒模板质粒 pDTW201 及 pDTW202 的构建 | 第26-27页 |
| ·对新构建的表达系统及敲除系统各项性质验证 | 第27-29页 |
| ·新型表达系统实用性验证 | 第27页 |
| ·表达载体 pJYW-4 的各项性质测定 | 第27-28页 |
| ·对敲除系统实用性验证 | 第28-29页 |
| ·新构建的表达系统及敲除系统用于菌株代谢工程改造 | 第29-31页 |
| ·YTW-102 基因敲除 | 第29页 |
| ·构建过表达载体 pJYW-4-ilvBNCE-brnFE1 | 第29-30页 |
| ·L-缬氨酸生产菌株 YTW-104/ pJYW-4-ilvBNCE-brnFE1 的构建及发酵 | 第30-31页 |
| 第三章 结果和讨论 | 第31-49页 |
| ·构建含有两套筛选标记的的穿梭表达载体 pJYW-4 及 pJYW-5 | 第31-37页 |
| ·表达载体 pJYW-4 及 pJYW-5 的构建 | 第31-34页 |
| ·alr 敲除质粒 pJYW-6 的构建及 alr 基因敲除 | 第34页 |
| ·表达系统实用性验证 | 第34-36页 |
| ·pJYW-4/5 的载体性质测试 | 第36-37页 |
| ·敲除系统用于 C. glutamicum ATCC 14067 中基因的连续敲除 | 第37-43页 |
| ·敲除系统各质粒的构建 | 第38页 |
| ·质粒 pDTW109 在 C. glutamicum 中氯霉素抗性及温敏特性 | 第38-40页 |
| ·敲除系统用于 C. glutamicum 中基因连续敲除 | 第40-43页 |
| ·pJYW-4 用于菌株基因表达改造提高其缬氨酸产量 | 第43-49页 |
| ·菌株 YTW-104/pJYW-4-ilvBNCE-brnFE1 的构建 | 第44-45页 |
| ·YTW-104/pJYW-4-ilvBNCE-brnFE1 发酵实验及其 L-缬氨酸产量分析 | 第45-47页 |
| ·YTW-104/pJYW-4-ilvBNCE-brnFE1 复合培养基中无抗条件下发酵 | 第47-49页 |
| 主要结论与展望 | 第49-51页 |
| 主要结论 | 第49-50页 |
| 展望 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第58页 |
