| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 主要符号表 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-27页 |
| ·脂肪酶的研究概况 | 第14-20页 |
| ·脂肪酶的来源 | 第14-15页 |
| ·脂肪酶的催化特性 | 第15页 |
| ·脂肪酶的应用 | 第15-19页 |
| ·在油脂化工行业的应用 | 第16页 |
| ·生产可生物降解的聚合物 | 第16-17页 |
| ·在洗涤剂行业的应用 | 第17页 |
| ·在食品生产以及改善食品风味质量中的应用 | 第17-18页 |
| ·分离外消旋体 | 第18页 |
| ·在烘焙、糖果和奶酪调味中的应用 | 第18页 |
| ·在生物柴油合成中的应用 | 第18-19页 |
| ·脂肪酶活性测定 | 第19页 |
| ·本实验研究脂肪酶基因 | 第19-20页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第20-26页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达宿主菌 | 第21-22页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达载体 | 第22-23页 |
| ·信号肽 | 第22页 |
| ·启动子 | 第22-23页 |
| ·外源基因的转化以及整合 | 第23页 |
| ·影响外源基因在毕赤酵母中表达的因素 | 第23-26页 |
| ·宿主菌的影响 | 第23-24页 |
| ·表达载体的影响 | 第24页 |
| ·外源基因的特性及拷贝数的影响 | 第24-25页 |
| ·表达条件的影响 | 第25-26页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第26-27页 |
| 第二章 材料与方法 | 第27-41页 |
| ·材料与仪器 | 第27-32页 |
| ·菌株 | 第27页 |
| ·质粒 | 第27-28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·大肠杆菌培养基配制 | 第28页 |
| ·酵母培养基的配制 | 第28页 |
| ·试剂和酶 | 第28-29页 |
| ·仪器和设备 | 第29-30页 |
| ·实验主要溶液的配制方法 | 第30-31页 |
| ·引物 | 第31-32页 |
| ·方法 | 第32-41页 |
| ·琼脂糖凝胶回收纯化目的DNA片段 | 第32页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第32-33页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌的常规转化及快速转化 | 第34页 |
| ·毕赤酵母GS115PEG1000化学转化法感受态细胞的制备 | 第34-35页 |
| ·毕赤酵母重组表达载体的构建 | 第35-36页 |
| ·P.pastoris的化学转化 | 第36-37页 |
| ·阳性转化子的筛选 | 第37页 |
| ·脂肪酶基因在毕赤酵母中的诱导表达 | 第37-38页 |
| ·SDS-PAGE检测目的蛋白表达 | 第38-41页 |
| ·目的蛋白浓度测定 | 第39-41页 |
| 第三章 结果与分析 | 第41-49页 |
| ·PCR扩增脂肪酶基因 | 第41页 |
| ·pHBM905A-LipA和pHBM905BDM-LipA表达载体的构建 | 第41-43页 |
| ·橄榄油罗丹明B平板对转化子的筛选 | 第43-44页 |
| ·脂肪酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第44-46页 |
| ·蛋白浓度的检测及比较 | 第46-49页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第49-51页 |
| ·讨论 | 第49页 |
| ·展望 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 致谢 | 第55页 |