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hsa-miR-218调控ALAS2在红细胞分化中的作用和机制研究

致谢第1-6页
摘要第6-7页
ABSTRACT第7-8页
专业词汇中英文对照表第8-9页
目录第9-12页
引言第12-14页
第一章 文献综述第14-26页
   ·红细胞分化第14-16页
     ·造血系统的发育第14页
     ·红细胞分化第14-15页
     ·转录因子对红细胞分化的调控第15-16页
   ·ALAS2与血红素合成途径及铁代谢第16-22页
     ·氨基酮戊酸合成酶(ALAS2)第16-17页
     ·ALAS2与血红素合成第17-18页
     ·ALAS2与铁代谢第18-22页
   ·miRNA对红细胞分化和发育的调控第22-26页
     ·miRNAs对造血系统的调控第22页
     ·miRNAs对红细胞分化的调控第22-24页
     ·miRNAs对铁代谢的调控第24页
     ·hsa-miR-218第24-26页
第二章 材料与方法第26-46页
   ·实验材料第26-32页
     ·细胞样品第26页
     ·实验试剂和耗材第26-27页
     ·试剂盒第27页
     ·所用溶液和培养基第27页
     ·实验仪器第27页
     ·菌株第27-28页
     ·质粒第28-29页
     ·引物第29-32页
     ·DNA测序第32页
     ·引物合成第32页
     ·生物信息学分析软件第32页
   ·实验方法第32-46页
     ·细胞的培养第32页
     ·细胞的复苏第32页
     ·细胞的传代和扩大培养第32页
     ·细胞的冻存第32-33页
     ·DH5α感受态细胞的制备第33页
     ·质粒DNA转化E.coli感受态细胞第33页
     ·质粒的小量提取第33-34页
     ·普通DNA产物的纯化第34-35页
     ·普通琼脂糖凝胶DNA回收第35页
     ·血液基因组DNA的提取第35-36页
     ·苯酚/氯仿抽提法提取质粒DNA第36-37页
     ·限制性内切酶作用第37页
     ·琼脂糖凝胶电泳第37-38页
     ·PCR反应第38页
     ·DNA连接反应第38-39页
     ·定点突变第39-40页
     ·细胞的化学转染第40-41页
     ·电转染第41页
     ·细胞转染后荧光素酶的检测第41页
     ·Trizol法提取细胞总RNA第41-42页
     ·Real-time PCR第42-43页
     ·miRNA的Real time PCR第43-46页
第三章 结果与讨论第46-64页
   ·ALAS2的表达分析第46-48页
     ·高通量测序检测ALAS2的表达水平第46-47页
     ·ALAS2在不同组织中的表达水平第47页
     ·ALAS2在不同细胞中的表达水平第47-48页
     ·候选miRNAs的初步筛选第48-51页
     ·目标miRNA的最终确定第51-55页
     ·过表达候选miRNAs对内源性ALAS2的调控作用第52页
     ·过表达候选miRNAs对内源性和外源性ALAS2的调控作用第52-55页
     ·hsa-miR-218的基因结构和表达分析第55-57页
     ·hsa-miR-218的基因结构分析第55-56页
     ·hsa-miR-218在红细胞分化过程中的表达分析第56-57页
     ·hsa-miR-218和其靶基因ALAS2的结合关系第57-60页
     ·hsa-miR-218在K562细胞中的过表达第57页
     ·过表达hsa-miR-218对内源性ALAS2的下调作用第57-58页
     ·过表达hsa-miR-218对内源性和外源性ALAS2的下调作用第58页
     ·定向单点突变实验检测hsa-miR-218和ALAS2之间的结合关系第58-60页
     ·hsa-miR-218对红细胞分化影响的初步研究第60-64页
     ·hsa-miR-218对血红素加氧酶1的影响第60-61页
     ·hsa-miR-218对细胞内铁离子浓度水平的影响第61页
     ·hsa-miR-218对珠蛋白表达的影响第61-64页
第四章 结论第64-66页
参考文献第66-72页
附录第72-80页
作者简介及在学期间发表的学术论文与科研成果第80页

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