| 中文摘要 | 第1-18页 |
| ABSTRACT | 第18-25页 |
| 符号说明 | 第25-28页 |
| 第一节 PDCD4对肿瘤细胞自噬及其相关功能的影响 | 第28-55页 |
| 前言 | 第28-32页 |
| 自噬的生物学特性 | 第28-29页 |
| 自噬的研究及检测方法 | 第29-30页 |
| 自噬与肿瘤的关系 | 第30-31页 |
| 抑癌基因PDCD4生物学特性 | 第31页 |
| PDCD4抑癌机制研究 | 第31页 |
| 本节研究目的 | 第31-32页 |
| 材料 | 第32-36页 |
| 一、细胞、动物及试剂 | 第32-35页 |
| 二、主要仪器设备及其他 | 第35-36页 |
| 方法 | 第36-47页 |
| 一、肿瘤细胞系的培养 | 第36-37页 |
| 二、DNA质粒准备 | 第37-39页 |
| 三、脂质体转染(Lipofectamine) | 第39-40页 |
| 四、siPORT NeoFx干扰 | 第40-41页 |
| 五、稳筛细胞系构建及培养 | 第41页 |
| 六、细胞活性检测 | 第41页 |
| 七、Western blot | 第41-44页 |
| 八、免疫组化 | 第44-45页 |
| 九、免疫荧光 | 第45-47页 |
| 十、裸鼠体内成瘤实验 | 第47页 |
| 十一、统计学分析 | 第47页 |
| 结果 | 第47-50页 |
| (一) 体外实验发现PDCD4具有抑制肿瘤细胞自噬的作用 | 第47-48页 |
| (二) 裸鼠移植瘤实验证明PDCD4具有抑制自噬的作用 | 第48-49页 |
| (三) PDCD4对肿瘤细胞生长的抑制依赖于其对自噬的抑制 | 第49-50页 |
| 讨论 | 第50-54页 |
| 小结 | 第54-55页 |
| 第二节 PDCD4对巨噬细胞自噬及其相关功能的影响 | 第55-79页 |
| 前言 | 第55-59页 |
| 自噬调节胆固醇流出 | 第56-57页 |
| 巨噬细胞自噬在动脉粥样硬化中的作用 | 第57-58页 |
| Pdcd4参与多种炎症性、免疫性及代谢性疾病进程 | 第58-59页 |
| 本节研究目的 | 第59页 |
| 材料 | 第59-62页 |
| 一、细胞、动物及试剂 | 第59-62页 |
| 二、主要仪器设备及其他 | 第62页 |
| 方法 | 第62-70页 |
| 一、巨噬细胞系RAW264.7培养 | 第62页 |
| 二、Wetstern blot | 第62页 |
| 三、巨噬细胞的分离及鉴定 | 第62-63页 |
| 四、小鼠脾脏淋巴细胞分离 | 第63页 |
| 五、泡沫化细胞形成实验 | 第63-64页 |
| 六、巨噬细胞吞噬功能检测 | 第64页 |
| 七、细胞及组织切片染色 | 第64-65页 |
| 八、MDC染色 | 第65页 |
| 九、自噬的诱导 | 第65-66页 |
| 十、RT-PCR | 第66-68页 |
| 十一、小鼠动脉粥样硬化模型建立 | 第68页 |
| 十二、血管组织获取与切片的制备 | 第68页 |
| 十三、骨髓细胞移植实验 | 第68-70页 |
| 十四、统计学分析 | 第70页 |
| 结果 | 第70-75页 |
| (一) Pdcd4能抑制不同刺激诱导的巨噬细胞自噬 | 第70-71页 |
| (二) Pdcd4介导的自噬对巨噬细胞泡沫化的影响 | 第71-73页 |
| (三) Pdcd4介导的巨噬细胞自噬在动脉粥样硬化中的作用 | 第73-75页 |
| 讨论 | 第75-78页 |
| 小结 | 第78-79页 |
| 第三节 PDCD4抑制自噬的分子机制 | 第79-93页 |
| 前言 | 第79-82页 |
| BECN1及其结合复合体 | 第79-80页 |
| ATG5、ATG12、LC3和类泛素连接体系 | 第80-81页 |
| PDCD4参与蛋白表达调控 | 第81-82页 |
| 本节研究目的 | 第82页 |
| 材料 | 第82-83页 |
| 一、细胞、临床标本、实验动物及试剂 | 第82-83页 |
| 二、主要仪器设备及其他 | 第83页 |
| 方法 | 第83-87页 |
| 一、细胞培养 | 第83-84页 |
| 二、细胞转染、RNA干扰 同第一节 | 第84页 |
| 三、RT-PCR 同第二节 | 第84页 |
| 四、免疫组化及免疫荧光 | 第84页 |
| 五、Western blot | 第84页 |
| 六、RNA共沉淀实验 | 第84-86页 |
| 七、细胞活性分析 | 第86页 |
| 八、统计学分析 | 第86-87页 |
| 结果 | 第87-89页 |
| (一) PDCD4抑制ATG5蛋白表达 | 第87-88页 |
| (二) PDCD4抑制ATG5表达依赖其ma3功能域 | 第88-89页 |
| 讨论 | 第89-91页 |
| 小结 | 第91-93页 |
| 附图表 | 第93-123页 |
| 第一节 PDCD4对肿瘤细胞自噬及其相关功能的影响 | 第93-104页 |
| 第二节 PDCD4对巨噬细胞自噬及其相关功能的影响 | 第104-118页 |
| 第三节 PDCD4抑制自噬的分子机制 | 第118-123页 |
| 参考文献 | 第123-139页 |
| 致谢 | 第139-140页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第140-141页 |
| 附件1 | 第141-154页 |
| 附件2 | 第154-198页 |
| 附表 | 第198页 |
