| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 引言 | 第12-14页 |
| 1 文献综述 | 第14-22页 |
| ·支原体概述 | 第14页 |
| ·绵羊肺炎支原体的分类地位和生物学特性 | 第14-16页 |
| ·绵羊肺炎支原体的分类地位 | 第14-15页 |
| ·绵羊肺炎支原体的菌落形态和结构 | 第15页 |
| ·绵羊肺炎支原体的理化特性和培养特性 | 第15-16页 |
| ·绵羊肺炎支原体的流行病学特点 | 第16页 |
| ·绵羊肺炎支原体感染的诊断 | 第16-19页 |
| ·绵羊肺炎支原体感染后的临床症状 | 第16-17页 |
| ·绵羊肺炎支原体感染后的病理变化 | 第17页 |
| ·绵羊肺炎支原体的实验室诊断 | 第17-19页 |
| ·绵羊肺炎支原体的基因组学和蛋白组学研究 | 第19-20页 |
| ·绵羊肺炎支原体的防治措施 | 第20-21页 |
| ·接种疫苗 | 第20-21页 |
| ·药物治疗 | 第21页 |
| ·展望 | 第21-22页 |
| 2 绵羊肺炎支原体 Y98 P26、P40 及 HSP70C 单基因的克隆与表达 | 第22-41页 |
| 摘要 | 第22页 |
| ·材料 | 第22-23页 |
| ·菌株 | 第22页 |
| ·载体及引物 | 第22页 |
| ·试剂 | 第22-23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-32页 |
| ·设计引物 | 第23页 |
| ·绵羊肺炎支原体 P26 、P40 和 HSP70C 目的基因扩增 | 第23-25页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第25页 |
| ·PCR 产物回收 | 第25-26页 |
| ·P26、P40 和 HSP70C 基因与克隆载体的连接 | 第26页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第26页 |
| ·转化 | 第26-27页 |
| ·重组克隆质粒的菌落 PCR 鉴定 | 第27页 |
| ·重组克隆质粒的小量提取 | 第27页 |
| ·重组克隆质粒的双酶切鉴定 | 第27-28页 |
| ·P26、P40 与 HSP70C 目的基因测序与同源性比对 | 第28页 |
| ·P26 与 P40 目的基因的定点突变及序列分析 | 第28-30页 |
| ·P26、P40 与 HSP70C 目的基因原核表达载体的构建 | 第30页 |
| ·重组表达质粒的筛选与鉴定 | 第30页 |
| ·重组菌株的诱导表达与超声破碎 | 第30-31页 |
| ·蛋白样的制备 | 第31页 |
| ·表达产物的 SDS-PAGE 分析 | 第31页 |
| ·表达产物的 Western blot 分析 | 第31-32页 |
| ·结果与分析 | 第32-40页 |
| ·绵羊肺炎支原体 Y98 外膜蛋白 P26、P40 和 HSP70C 基因的 PCR 扩增结果 | 第32-33页 |
| ·HSP70C 基因和突变前 P26、P40 基因的重组克隆质粒的鉴定结果 | 第33-34页 |
| ·P26、P40 和 HSP70C 基因的测序及序列比对结果 | 第34-35页 |
| ·P26 和 P40 基因的定点突变结果及序列分析 | 第35页 |
| ·突变后 P26 和 P40 基因的重组克隆质粒的鉴定结果 | 第35-36页 |
| ·P26、P40 和 HSP70C 基因的重组表达质粒的鉴定结果 | 第36-38页 |
| ·重组菌株表达产物的 SDS-PAGE 和 Wetern blot 分析 | 第38-40页 |
| ·小结 | 第40-41页 |
| 3 绵羊肺炎支原体 Y98 P26-P40 融合基因的构建、表达及免疫原性研究 | 第41-54页 |
| 摘要 | 第41页 |
| ·材料 | 第41-42页 |
| ·菌株 | 第41页 |
| ·载体及引物 | 第41页 |
| ·试剂 | 第41-42页 |
| ·供试动物 | 第42页 |
| ·主要仪器设备 | 第42页 |
| ·方法 | 第42-47页 |
| ·P26-P40 融合基因原核表达载体的构建 | 第42-43页 |
| ·重组菌株的诱导表达及 Western blot 分析 | 第43页 |
| ·基因工程疫苗的制备 | 第43-44页 |
| ·疫苗安全性检测 | 第44页 |
| ·小鼠攻毒剂量的测定 | 第44页 |
| ·小鼠免疫试验 | 第44-45页 |
| ·间接 ELISA 检测血清中的抗体效价 | 第45页 |
| ·P26-P40 抗体的 Western blot 分析 | 第45-46页 |
| ·肺组织冰冻切片制作 | 第46-47页 |
| ·羔羊免疫试验 | 第47页 |
| ·结果与分析 | 第47-52页 |
| ·P26-P40 融合基因的重组表达质粒的鉴定结果 | 第47-48页 |
| ·重组菌株表达产物的 SDS-PAGE 和 Wetern blot 分析 | 第48-49页 |
| ·基因工程疫苗的安全性检测 | 第49页 |
| ·小鼠攻毒剂量的测定 | 第49页 |
| ·间接 ELISA 结果 | 第49-50页 |
| ·血清中抗体的 Western blot 分析 | 第50-51页 |
| ·基因工程疫苗的保护效果 | 第51页 |
| ·小鼠肺组织冷冻切片结果 | 第51-52页 |
| ·羔羊试验结果 | 第52页 |
| ·小结 | 第52-54页 |
| 4 绵羊肺炎支原体 Y98 P26-HSP70C 融合基因的构建、表达及免疫原性研究 | 第54-62页 |
| 摘要 | 第54页 |
| ·材料 | 第54-55页 |
| ·菌株 | 第54页 |
| ·载体及引物 | 第54页 |
| ·试剂 | 第54-55页 |
| ·供试动物 | 第55页 |
| ·主要仪器设备 | 第55页 |
| ·方法 | 第55-57页 |
| ·P26-HSP70C 融合基因原核表达载体的构建 | 第55-56页 |
| ·重组菌株的诱导表达及 Western blot 分析 | 第56页 |
| ·P26-HSP70C 基因工程疫苗的制备及安全性检测 | 第56页 |
| ·小鼠免疫实验 | 第56-57页 |
| ·结果与分析 | 第57-60页 |
| ·P26-HSP70C 融合基因的重组表达质粒的鉴定结果 | 第57页 |
| ·重组菌株表达产物的 SDS-PAGE 和 Western blot 分析 | 第57-58页 |
| ·基因工程疫苗的安全性检测 | 第58页 |
| ·间接 ELISA 结果 | 第58-59页 |
| ·血清中抗体的 Western blot 分析 | 第59页 |
| ·基因工程疫苗的保护效果 | 第59-60页 |
| ·小鼠肺组织冷冻切片结果 | 第60页 |
| ·小结 | 第60-62页 |
| 讨论 | 第62-64页 |
| 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 附录 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 攻读学位期间取得的科研成果清单 | 第72页 |
