| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第13-24页 |
| ·问题由来 | 第13页 |
| ·文献综述 | 第13-23页 |
| ·miRNAs研究概述 | 第13-15页 |
| ·miRNAs的研究方法和手段 | 第15-17页 |
| ·毛囊发育相关miRNAs的研究进展 | 第17-19页 |
| ·miR-320调控毛囊发育的研究进展 | 第19-20页 |
| ·miR-148b的研究进展及其与毛囊发育的研究进展 | 第20-21页 |
| ·Wnt信号通路与毛囊发育的研究进展 | 第21-23页 |
| ·研究目的与意义 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-39页 |
| ·技术路线 | 第24页 |
| ·实验试剂和设备 | 第24-25页 |
| ·常用试剂 | 第24-25页 |
| ·实验室常用设备 | 第25页 |
| ·组织样品 | 第25-26页 |
| ·菌株、载体和细胞 | 第26页 |
| ·菌株 | 第26页 |
| ·载体 | 第26页 |
| ·细胞 | 第26页 |
| ·细胞转染 | 第26-27页 |
| ·转染方法 | 第26-27页 |
| ·miRNA模拟物 | 第27页 |
| ·RNA提取与检测 | 第27-28页 |
| ·RNA提取 | 第27-28页 |
| ·提取RNA的质量检测 | 第28页 |
| ·quantitative(Q)-PCR | 第28-29页 |
| ·蛋白质免疫印迹技术(Western Blot) | 第29-33页 |
| ·试剂配制和耗材 | 第29-30页 |
| ·蛋白样品收集 | 第30页 |
| ·蛋白样品浓度测定 | 第30-31页 |
| ·蛋白质免疫印迹 | 第31-33页 |
| ·双荧光素酶报告基因系统检测miRNA与预测靶基因的结合位点 | 第33-35页 |
| ·双荧光素酶报告基因系统的结构 | 第33页 |
| ·双荧光素酶报告基因载体的构建 | 第33-34页 |
| ·细胞内重组载体结合位点的验证 | 第34-35页 |
| ·荧光素酶活性的检测 | 第35页 |
| ·Wnt信号通路活性报告系统 | 第35-37页 |
| ·Wnt信号通路活性报告系统的结构 | 第35-36页 |
| ·PRL-TK载体结构 | 第36-37页 |
| ·细胞增殖检测方法 | 第37-38页 |
| ·Edu标记染色检测细胞增殖 | 第37-38页 |
| ·xCELLigene细胞实时定量监控系统检测细胞增殖 | 第38页 |
| ·生物信息学相关工具和网站 | 第38页 |
| ·数据统计分析 | 第38-39页 |
| 3 结果 | 第39-50页 |
| ·藏绵羊基因组miR-148b和miR-320的序列克隆 | 第39-40页 |
| ·miR-148b和miR-320在藏绵羊毛囊发育不同时期的表达 | 第40-41页 |
| ·miR-148b和miR-320对人毛囊细胞增殖的影响 | 第41-44页 |
| ·Edu检测miR-148b和miR-320对人毛乳头细胞和人毛母质细胞细胞增殖的影响 | 第41-43页 |
| ·用xCELLigence检测miR-148b和miR-320对人毛乳头细胞和人毛母质细胞细胞增殖的影响 | 第43-44页 |
| ·miR-148b和miR-320对Wnt信号通路活性的影响 | 第44页 |
| ·miR-148b和miR-320对β-catenin表达变化的影响 | 第44-46页 |
| ·miR-148b和miR-320对Wnt通路下游转录因子表达的影响 | 第46-48页 |
| ·miR-148b在毛囊发育过程中发挥作用的靶基因的预测与验证 | 第48-50页 |
| ·miR-148b在毛囊发育过程中发挥作用的靶基因的预测 | 第48页 |
| ·miR-148b在毛囊发育过程中重要靶基因的验证 | 第48-50页 |
| 4 讨论 | 第50-53页 |
| ·miR-148b和miR-320对毛囊细胞增殖的影响 | 第50-51页 |
| ·miR-148b和miR-320靶向调控Wnt信号通路的活性 | 第51-52页 |
| ·miR-148b和miR-320在毛囊发育过程中的作用及其机制 | 第52-53页 |
| 5 小结 | 第53-55页 |
| ·本研究的主要结果与结论 | 第53页 |
| ·本研究的创新点 | 第53-54页 |
| ·本研究的不足之处以及下一步工作建议 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
