| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 文献综述 | 第13-19页 |
| 第一章 肺炎克雷伯氏菌与牛乳腺上皮细胞体外感染模型的建立 | 第19-40页 |
| ·实验材料 | 第19-21页 |
| ·主要仪器和设备 | 第19页 |
| ·活体材料 | 第19-20页 |
| ·主要试剂与耗材 | 第20页 |
| ·主要溶剂的配制 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-26页 |
| ·细胞的分离培养 | 第21页 |
| ·生长曲线的测定 | 第21页 |
| ·侵染实验 | 第21-22页 |
| ·粘附实验 | 第22页 |
| ·扫描电镜 | 第22页 |
| ·透射电镜 | 第22页 |
| ·Hoechst 33342染色 | 第22-23页 |
| ·流式细胞仪检测细胞凋亡试验 | 第23页 |
| ·Real-time PCR检测肺炎克雷伯氏菌感染牛乳腺上皮细胞前后细胞因子的变化 | 第23-25页 |
| ·ELISA检测感染后TNF-α及IL-1β的表达 | 第25页 |
| ·统计学分析方法 | 第25-26页 |
| ·实验结果 | 第26-37页 |
| ·牛乳腺上皮细胞原代培养结果 | 第26页 |
| ·肺炎克雷伯氏菌生长曲线 | 第26-27页 |
| ·肺炎克雷伯氏菌对牛乳腺上皮细胞粘附侵染率结果 | 第27-28页 |
| ·光镜观察结果 | 第28-29页 |
| ·扫描电镜观察结果 | 第29页 |
| ·透射电镜观察结果 | 第29-30页 |
| ·Hoechst染色结果 | 第30-31页 |
| ·Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡 | 第31-33页 |
| ·Real-time PCR检测感染前后NODs及RIP2的变化结果 | 第33-34页 |
| ·Real-time PCR检测感染前后TLR2,TLR4,TLR6及TLR9的变化结果 | 第34-35页 |
| ·Real-time PCR检测感染前后TNF-α及IL-1β的变化结果 | 第35-36页 |
| ·Elisa检测感染前后TNF-α及IL-1β的变化结果 | 第36-37页 |
| ·Real-time PCR检测感染前后IL-6及IL-8的变化结果 | 第37页 |
| ·讨论 | 第37-40页 |
| 第二章 深度测序技术分析肺炎克雷伯氏菌毒染牛乳腺上皮细胞前后基因表达谱的变化 | 第40-59页 |
| ·实验材料 | 第40-41页 |
| ·主要仪器设备 | 第40-41页 |
| ·主要试剂与耗材 | 第41页 |
| ·细菌及细胞 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-45页 |
| ·感染肺炎克雷伯氏菌后的牛乳腺上皮细胞总RNA提取 | 第41-42页 |
| ·Tag制备及测序 | 第42页 |
| ·基因表达注释 | 第42页 |
| ·差异性表达基因的筛选 | 第42页 |
| ·差异性表达基因的GO功能显著性富集分析 | 第42-43页 |
| ·差异性表达基因的Pathway显著性富集分析 | 第43页 |
| ·Real-time PCR验证深度测序数据 | 第43-45页 |
| ·实验结果 | 第45-57页 |
| ·细胞总RNA提取质量评估 | 第45页 |
| ·测序数据的评估结果 | 第45-47页 |
| ·差异性表达基因的蹄选结果 | 第47-50页 |
| ·差异性表达基因的GO功能显著性富集分析 | 第50-51页 |
| ·差异性表达基因的Pathway显著性富集分析结果 | 第51-52页 |
| ·先天性免疫相关基因蹄选结果 | 第52-54页 |
| ·氧化应激、氧化碟酸化及细胞调亡相关基因蹄选结果 | 第54-55页 |
| ·劳光定量PCR验证测序数据结果 | 第55-57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| 第三章 NOD1 siRNA载体的构建及沉默NOD1对乳腺上皮细胞抗菌免疫作用的初探 | 第59-67页 |
| ·实验材料 | 第60页 |
| ·主要仪器设备 | 第60页 |
| ·主要试剂与耗材 | 第60页 |
| ·细菌及细胞 | 第60页 |
| ·实验方法 | 第60-61页 |
| ·化学合成siRNA表达载体 | 第60-61页 |
| ·siRNA表达载体转染牛乳腺上皮细胞 | 第61页 |
| ·Real-time PCR法检测肺炎克雷伯氏菌感染转染后牛乳腺上皮细胞NOD蛋白及相关炎性因子表达情况 | 第61页 |
| ·实验结果 | 第61-65页 |
| ·表达载体P-SIREN-RetroQ-DsRed-Express转染牛乳腺上皮细胞 | 第62页 |
| ·siRNA转染牛乳腺上皮细胞后Real-Time PCR检测NOD1及RIP2的表达结果 | 第62-63页 |
| ·siRNA转染牛乳腺上皮细胞后Real-Time PCR检测TLR2、TLR4、TLR6及TLR9的表达结果 | 第63-64页 |
| ·siRNA转染牛乳腺上皮细胞后Real-Time PCR检测TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-8的表达结果 | 第64-65页 |
| ·讨论 | 第65-67页 |
| 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-84页 |
| 硕士期间发表学术论文 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 附录 | 第86-88页 |
