| 致谢 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 研究背景 | 第11-38页 |
| 第一节 细胞因子简介 | 第11-12页 |
| 第二节 脊椎动物肿瘤坏死因子的发现及相关研究 | 第12-32页 |
| 一、 肿瘤坏死因子超家族的发现史及研究进展 | 第12-13页 |
| 二、 肿瘤坏死因子超家族的结构及分类 | 第13-18页 |
| 三、 肿瘤坏死因子超家族的功能及其与生命活动的密切关系 | 第18-21页 |
| 四、 肿瘤坏死因子超家族的作用机制 | 第21-32页 |
| 第三节 无脊椎动物肿瘤坏死因子的研究进展 | 第32-36页 |
| 第四节 本研究的主要目的及意义 | 第36-38页 |
| 一、 研究意义 | 第36页 |
| 二、 研究内容 | 第36-38页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第38-55页 |
| 第一节 实验材料 | 第38-41页 |
| 一、 实验用动物及相关菌株 | 第38页 |
| 二、 实验用细胞株 | 第38-39页 |
| 三、 实验用试剂及主要仪器 | 第39-40页 |
| 四、 实验用引物的主要信息 | 第40-41页 |
| 第二节 实验方法 | 第41-55页 |
| 一、 长牡蛎总 RNA 的提取 | 第41页 |
| 二、 cDNA 文库的构建 | 第41-42页 |
| 三、 目的基因的克隆及测序 | 第42-43页 |
| 四、 基于双酶切技术构建重组质粒 | 第43-44页 |
| 五、 基于 His 标签的重组蛋白的可溶性原核表达及纯化 | 第44-45页 |
| 六、 多克隆抗体的制备及鉴定 | 第45-46页 |
| 七、 western blotting 分析 | 第46页 |
| 八、 实时荧光定量 PCR | 第46-47页 |
| 九、 长牡蛎血淋巴细胞的原代培养 | 第47页 |
| 十、 免疫荧光组化 | 第47-48页 |
| 十一、LPS 刺激及牡蛎组织材料的收集 | 第48-49页 |
| 十二、CgTNF-1 免疫剂量确定实验 | 第49页 |
| 十三、LPS 和 CgTNF-1 共刺激实验及血细胞和血淋巴上清的收集 | 第49-50页 |
| 十四、血淋巴细胞凋亡作用的检测 | 第50页 |
| 十五、血淋巴细胞吞噬作用的检测 | 第50-51页 |
| 十六、血淋巴上清 NO 含量及免疫相关酶的检测 | 第51-52页 |
| 十七、血淋巴上清抗菌能力的检测 | 第52页 |
| 十八、ELISA 检测 PAMPs 结合实验 | 第52-53页 |
| 十九、细胞增殖与毒性检测实验 | 第53-54页 |
| 二十、实验数据处理 | 第54-55页 |
| 第三章 实验结果 | 第55-72页 |
| 第一节 CgTNF-1 分子的基本特征 | 第55-56页 |
| 一、 CgTNF-1 分子的筛选及基本特征 | 第55页 |
| 二、 CgTNF-1 蛋白同源性和进化分析 | 第55-56页 |
| 第二节 CgTNF-1 的原核可溶性表达和抗体制备 | 第56-59页 |
| 第三节 CgTNF-1 的组织分布和细胞定位 | 第59-60页 |
| 一、 CgTNF-1 mRNA 在长牡蛎组织中的分布 | 第59页 |
| 二、 CgTNF-1 在长牡蛎细胞中的定位 | 第59-60页 |
| 第四节 LPS 刺激后牡蛎血淋巴中 CgTNF-1 基因在转录和翻译水平的时序变化 | 第60-62页 |
| 一、 LPS 刺激后血淋巴细胞中 CgTNF-1mRNA 表达水平的时序变化 | 第60-61页 |
| 二、 LPS 刺激后牡蛎血淋巴上清中 CgTNF-1 蛋白表达量的时序变化 | 第61-62页 |
| 第五节 LPS 和 CgTNF-1 处理对牡蛎血淋巴中相关免疫指标的影响 | 第62-68页 |
| 一、 CgTNF-1 分子注射剂量的确定 | 第62-63页 |
| 二、 LPS 和 CgTNF-1 处理后牡蛎血淋巴细胞凋亡和吞噬率的时序变化 | 第63-65页 |
| 三、 LPS 和 CgTNF-1 处理后牡蛎血淋巴上清中 NO、相关酶活性以及抗菌能力的时序变化 | 第65-68页 |
| 第六节 CgTNF-1 对细胞增殖的影响 | 第68-70页 |
| 第七节 CgTNF-1 的 PAMPs 结合活性分析 | 第70-72页 |
| 第四章 分析与讨论 | 第72-79页 |
| 第一节 牡蛎中肿瘤坏死因子的基本特征及分布 | 第73-74页 |
| 一、 CgTNF-1 分子的基本特征 | 第73-74页 |
| 二、 CgTNF-1 在牡蛎组织中的分布以及在血淋巴细胞中的定位 | 第74页 |
| 第二节 免疫刺激能够诱导 CgTNF-1 的表达 | 第74-75页 |
| 第三节 CgTNF-1 对牡蛎免疫应答反应的调节作用 | 第75-77页 |
| 一、 CgTNF-1 分子注射剂量的确定 | 第76页 |
| 二、 CgTNF-1 对牡蛎细胞免疫的影响 | 第76页 |
| 三、 CgTNF-1 对牡蛎体液免疫的影响 | 第76-77页 |
| 第四节 CgTNF-1 对肿瘤细胞的杀伤作用及其 PAMPs 结合能力 | 第77-79页 |
| 第五章 结论 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-99页 |
| 作者简历 | 第99-100页 |
| 已发表的论文 | 第100页 |
