紫花苜蓿MsZFN及拟南芥HST基因鉴定
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-16页 |
| 英文缩略表 | 第16-17页 |
| 第一章 引言 | 第17-25页 |
| ·紫花苜蓿转基因研究进展 | 第17-20页 |
| ·转耐盐碱基因 | 第17-18页 |
| ·转抗寒冷基因 | 第18页 |
| ·转抗旱基因 | 第18-19页 |
| ·转耐铝胁迫基因 | 第19页 |
| ·转抗病、虫基因 | 第19-20页 |
| ·转品质改良基因 | 第20页 |
| ·CCCH 类型锌指蛋白研究进展 | 第20-22页 |
| ·互作方式 | 第21页 |
| ·功能 | 第21-22页 |
| ·植物开花调控研究进展 | 第22-24页 |
| ·光周期途径 | 第22页 |
| ·春化途径 | 第22-23页 |
| ·自主途径 | 第23页 |
| ·赤霉素途径 | 第23-24页 |
| ·HST 基因研究进展 | 第24页 |
| ·本研究的目的意义 | 第24-25页 |
| 第二章 MSZFN 基因克隆及载体构建 | 第25-34页 |
| ·材料与试剂 | 第25页 |
| ·植物材料 | 第25页 |
| ·酶和生化试剂 | 第25页 |
| ·试验仪器 | 第25页 |
| ·引物 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-30页 |
| ·基因组 DNA 提取 | 第25-26页 |
| ·RNA 提取 | 第26页 |
| ·MsZFN gDNA 扩增 | 第26-27页 |
| ·cDNA 合成 | 第27页 |
| ·MsZFN 基因 cDNA PCR 扩增 | 第27-28页 |
| ·PCR 产物切胶回收 | 第28页 |
| ·克隆载体构建 | 第28-29页 |
| ·表达载体构建 | 第29-30页 |
| ·结果与分析 | 第30-33页 |
| ·紫花苜蓿基因组 DNA 提取 | 第30页 |
| ·紫花苜蓿总 RNA 提取 | 第30-31页 |
| ·MsZFN gDNA 克隆 | 第31-32页 |
| ·MsZFN cDNA 克隆 | 第32页 |
| ·载体构建 | 第32-33页 |
| ·讨论 | 第33-34页 |
| 第三章 MSZFN 表达分析 | 第34-39页 |
| ·材料 | 第34页 |
| ·植物材料 | 第34页 |
| ·实验试剂 | 第34页 |
| ·实验仪器 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-36页 |
| ·引物设计 | 第34页 |
| ·材料处理 | 第34-35页 |
| ·荧光定量 RT-PCR 检测 | 第35页 |
| ·半定量 RT-PCR 检测 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-38页 |
| ·MsZFN 基因组织差异性 | 第36-37页 |
| ·MsZFN 基因受黑暗诱导 | 第37页 |
| ·MsZFN 基因不受 GA3诱导 | 第37-38页 |
| ·MsZFN 基因不受冷条件诱导 | 第38页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| 第四章 MSZFN 基因对烟草和拟南芥的转化 | 第39-43页 |
| ·材料 | 第39页 |
| ·植物材料 | 第39页 |
| ·菌株和质粒 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-40页 |
| ·培养基配制 | 第39页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第39页 |
| ·农杆菌转化及鉴定 | 第39-40页 |
| ·烟草转化（叶盘法） | 第40页 |
| ·拟南芥转化 | 第40页 |
| ·结果与分析 | 第40-41页 |
| ·农杆菌转化及鉴定 | 第40-41页 |
| ·转基因烟草获得 | 第41页 |
| ·转基因拟南芥获得 | 第41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| 第五章 转基因鉴定及功能分析 | 第43-50页 |
| ·材料 | 第43页 |
| ·植物材料 | 第43页 |
| ·生化试剂 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-44页 |
| ·基因组 DNA 提取 | 第43页 |
| ·再生烟草总 RNA 提取及反转录 | 第43页 |
| ·再生植株 PCR 检测 | 第43页 |
| ·转基因植株开花时间统计 | 第43-44页 |
| ·MsZFN 基因对开花基因的影响 | 第44页 |
| ·结果与分析 | 第44-48页 |
| ·烟草再生植株 PCR 检测 | 第44-45页 |
| ·转基因拟南芥的 RT-PCR 检测 | 第45页 |
| ·MsZFN 基因推迟转基因植物开花 | 第45-47页 |
| ·MsZFN 改变了转基因拟南芥开花控制基因表达 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-50页 |
| 第六章 白化苗表型分析及鉴定 | 第50-60页 |
| ·材料 | 第50-51页 |
| ·植物材料 | 第50页 |
| ·生化试剂 | 第50页 |
| ·实验仪器 | 第50页 |
| ·引物 | 第50-51页 |
| ·方法 | 第51-54页 |
| ·表型分析 | 第51页 |
| ·SEM 分析 | 第51页 |
| ·TEM 分析 | 第51页 |
| ·激素的提取 | 第51-52页 |
| ·样品测定 | 第52页 |
| ·结果计算 | 第52页 |
| ·TAIL-PCR | 第52-54页 |
| ·共分离分析 | 第54页 |
| ·RT-PCR 分析 | 第54页 |
| ·结果与分析 | 第54-58页 |
| ·突变体表型 | 第54-56页 |
| ·突变体激素水平 | 第56-57页 |
| ·T-DNA 插入位点 | 第57页 |
| ·T-DNA 插入与突变体表型关系 | 第57-58页 |
| ·RT-PCR 验证 | 第58页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| 第七章 HST 基因克隆及载体构建 | 第60-66页 |
| ·材料 | 第60页 |
| ·植物材料 | 第60页 |
| ·生化试剂 | 第60页 |
| ·实验仪器 | 第60页 |
| ·引物 | 第60页 |
| ·方法 | 第60-63页 |
| ·植物材料处理 | 第60页 |
| ·HST 基因克隆 | 第60-61页 |
| ·HST 启动子克隆 | 第61-62页 |
| ·载体构建 | 第62-63页 |
| ·结果与分析 | 第63-65页 |
| ·HST 基因及启动子克隆 | 第63-64页 |
| ·载体构建 | 第64-65页 |
| ·讨论 | 第65-66页 |
| 第八章 HST 转基因及鉴定 | 第66-70页 |
| ·材料 | 第66页 |
| ·植物材料 | 第66页 |
| ·菌株和质粒 | 第66页 |
| ·生化试剂 | 第66页 |
| ·引物设计 | 第66页 |
| ·方法 | 第66-67页 |
| ·培养基配制 | 第66页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第66页 |
| ·农杆菌转化 | 第66-67页 |
| ·拟南芥转化 | 第67页 |
| ·转基因植株 PCR 检测 | 第67页 |
| ·GUS 染色 | 第67页 |
| ·结果与分析 | 第67-69页 |
| ·35S_pro::HST 拟南芥转化及鉴定 | 第67-68页 |
| ·Anti-HST 拟南芥转化及鉴定 | 第68-69页 |
| ·HSTpro::GUS 拟南芥转化及鉴定 | 第69页 |
| ·讨论 | 第69-70页 |
| 第九章 HST 基因表达分析 | 第70-73页 |
| ·材料 | 第70页 |
| ·植物材料 | 第70页 |
| ·实验试剂 | 第70页 |
| ·实验仪器 | 第70页 |
| ·方法 | 第70-71页 |
| ·引物设计 | 第70页 |
| ·材料处理 | 第70页 |
| ·荧光定量 RT-PCR 检测 | 第70-71页 |
| ·组织化学染色分析 | 第71页 |
| ·结果与分析 | 第71-72页 |
| ·HST 基因组织差异性 | 第71页 |
| ·HST 基因在不同时期叶中表达 | 第71-72页 |
| ·讨论 | 第72-73页 |
| 第十章 全文结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 作者简历 | 第82页 |
