| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-25页 |
| ·南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)研究概况 | 第12-16页 |
| ·SRBSDV的发生与危害 | 第12页 |
| ·SRBSDV分类地位 | 第12页 |
| ·基因组结构及其功能 | 第12-14页 |
| ·南方水稻黑条矮缩病的病害症状 | 第14-15页 |
| ·发病规律及发生特点 | 第15页 |
| ·发生原因分析 | 第15-16页 |
| ·防治对策 | 第16页 |
| ·植物赤霉素的研究进展 | 第16-21页 |
| ·赤霉素的发现、结构及其生理作用 | 第16-17页 |
| ·赤霉素的合成代谢途径及其相关基因的研究 | 第17-20页 |
| ·赤霉素的信号传导途径及其相关基因的研究 | 第20-21页 |
| ·本研究中用到的关键核心技术 | 第21-24页 |
| ·荧光定量PCR技术 | 第21-22页 |
| ·农杆菌介导的水稻遗传转化技术 | 第22-23页 |
| ·酵母双杂交技术 | 第23-24页 |
| ·本研究的目的、意义 | 第24-25页 |
| 第二章 高效液相色谱法分析南方水稻黑条矮缩病毒胁迫下水稻赤霉素的动态变化 | 第25-33页 |
| ·材料、试剂及仪器 | 第25页 |
| ·材料 | 第25页 |
| ·试剂 | 第25页 |
| ·仪器 | 第25页 |
| ·SRBSDV检测引物 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-28页 |
| ·南方水稻黑条矮缩病毒的检测 | 第25-27页 |
| ·色谱条件的优化 | 第27-28页 |
| ·赤霉素的提取、纯化 | 第28页 |
| ·结果与分析 | 第28-32页 |
| ·SRBSDV病株的检测 | 第28-29页 |
| ·GA_3标准曲线的制作 | 第29-31页 |
| ·回收率的测定 | 第31页 |
| ·抽穗期水稻内源赤霉素含量的测定 | 第31-32页 |
| ·小结与讨论 | 第32-33页 |
| 第三章 SRBSDV对水稻赤霉素合成及诱导相关基因表达量的影响 | 第33-46页 |
| ·材料、试剂及仪器 | 第33页 |
| ·材料 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33页 |
| ·实验仪器 | 第33页 |
| ·方法 | 第33-36页 |
| ·水稻叶片总RNA的提取 | 第33页 |
| ·消化基因组DNA | 第33页 |
| ·RNA的纯化 | 第33-34页 |
| ·反转录 | 第34页 |
| ·荧光定量PCR引物的设计 | 第34页 |
| ·荧光定量PCR引物的筛选 | 第34-35页 |
| ·基因标准曲线的绘制 | 第35页 |
| ·qPCR检测水稻赤霉素合成与诱导相关基因表达量 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-44页 |
| ·Real-time PCR引物可靠性检测 | 第36页 |
| ·内参基因与目的基因标准曲线的制作 | 第36-41页 |
| ·赤霉素合成与诱导相关基因表达量的检测 | 第41-44页 |
| ·小结与讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 水稻赤霉素合成与诱导途径相关基因RNAi载体、过表达载体的构建及其农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第46-72页 |
| ·材料、试剂及仪器 | 第46页 |
| ·材料 | 第46页 |
| ·试剂及仪器 | 第46页 |
| ·方法 | 第46-56页 |
| ·RNAi载体的构建 | 第46-51页 |
| ·过表达载体构建 | 第51-52页 |
| ·RNAi载体和过表达载体转化农杆菌 | 第52-53页 |
| ·农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第53-55页 |
| ·转基因水稻的检测 | 第55-56页 |
| ·结果与分析 | 第56-70页 |
| ·RNAi载体的构建 | 第56-61页 |
| ·过表达载体的构建 | 第61-65页 |
| ·PCR鉴定转基因水稻 | 第65-68页 |
| ·转基因水稻表型分析 | 第68-70页 |
| ·小结与讨论 | 第70-72页 |
| 第五章 酵母双杂交系统检测水稻赤霉素合成与诱导相关酶GA20ox_1氧化酶、GA2ox_3氧化酶、GID2与SRBSDV病毒蛋白之间的互作情况 | 第72-81页 |
| ·材料及试剂 | 第72页 |
| ·菌株和质粒 | 第72页 |
| ·主要试剂 | 第72页 |
| ·引物设计 | 第72页 |
| ·方法 | 第72-75页 |
| ·目的基因酵母表达载体的构建 | 第72-73页 |
| ·AH109酵母感受态细胞的制备 | 第73页 |
| ·重组质粒共转化酵母感受态细胞 | 第73-74页 |
| ·蛋白互作的检测 | 第74-75页 |
| ·结果与分析 | 第75-79页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第75页 |
| ·重组质粒的菌液PCR鉴定 | 第75-77页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第77-78页 |
| ·水稻赤霉素合成与诱导相关基因酶GA20ox_1氧化酶、GA2ox_3氧化酶、GID2与SRBSDV病毒蛋白之间的互作检测 | 第78-79页 |
| ·小结与讨论 | 第79-81页 |
| 第六章 总结与展望 | 第81-83页 |
| ·总结 | 第81-82页 |
| ·展望 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-91页 |
| 附录一 荧光定量PCR引物名称及其序列 | 第91-92页 |
| 附录二 常用培养基的配制 | 第92-95页 |
| 附录三 本文所用的植物表达载体 | 第95-98页 |
| 附录四 转基因培养基的配制 | 第98-104页 |
| 附录五 酵母培养基的配制 | 第104-106页 |
| 致谢 | 第106页 |
