| 目录 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 符号及縮略语 | 第12-13页 |
| 第一篇 文献综述 | 第13-33页 |
| 第一章 环氧化物水解酶(EH)的研究进展 | 第13-23页 |
| 1 EH概述 | 第13页 |
| 2 EH结构与生物学功能 | 第13-16页 |
| ·EH的结构 | 第13-15页 |
| ·EH的生物功能 | 第15-16页 |
| 3 EH的催化机制 | 第16-19页 |
| 4 EH的应用前景 | 第19-20页 |
| 参考文献 | 第20-23页 |
| 第二章 巴斯德毕赤酵母表达系统的研究进展 | 第23-33页 |
| 1 毕赤酵母概述 | 第23页 |
| 2 毕赤酵母生物学特性 | 第23-24页 |
| 3 毕赤酵母表达系统的组成 | 第24-28页 |
| ·宿主菌株 | 第24-25页 |
| ·表达载体 | 第25-28页 |
| ·表达载体的转化及与毕赤酵母的整合 | 第28页 |
| 4 外源蛋白在毕赤酵母中的表达 | 第28-29页 |
| ·外源蛋白的表达方式 | 第28-29页 |
| ·表达产物的翻译后加工、修饰 | 第29页 |
| 5 毕赤酵母表达系统的应用 | 第29-30页 |
| 参考文献 | 第30-33页 |
| 第二篇 试验部分 | 第33-69页 |
| 第三章 NJA-1菌中DON降解酶基因真核表达载体的构建及其在巴斯德毕赤酵母中的表达 | 第33-59页 |
| 摘要 | 第33-34页 |
| 1 材料 | 第34-35页 |
| ·菌种和质粒 | 第34页 |
| ·主要酶与试剂 | 第34页 |
| ·主要仪器设备 | 第34-35页 |
| 2 实验方法 | 第35-47页 |
| ·原核表达载体菌pET32a(+)-EHse/BL21的活化及扩增培养 | 第35页 |
| ·pET32a(+)-EHse质粒的提取 | 第35-36页 |
| ·引物设计 | 第36页 |
| ·EH基因的PCR扩增及产物鉴定 | 第36-37页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第37页 |
| ·pMD-EHsq克隆载体的构建 | 第37-39页 |
| ·重组质粒pPIC9K-EHsq的构建 | 第39-42页 |
| ·重组表达载体转化毕赤酵母 | 第42-44页 |
| ·重组酵母的筛选 | 第44-46页 |
| ·pEH蛋白的诱导表达 | 第46-47页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE电泳 | 第47页 |
| 3 结果 | 第47-55页 |
| ·EH基因的PCR结果分析 | 第47-48页 |
| ·pMD-EHsq及pPIC9K大肠杆菌阳性克隆的筛选与鉴定 | 第48-49页 |
| ·重组质粒pMD-EHsq及真核载体质粒pPIC9K双酶切结果分析 | 第49-50页 |
| ·重组表达载体pPIC9K-EHsq鉴定结果分析 | 第50-52页 |
| ·转化GS115重组子的筛选和鉴定 | 第52-53页 |
| ·重组蛋白在GS115中的表达结果 | 第53-55页 |
| 4 讨论 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-58页 |
| 英文摘要 | 第58-59页 |
| 第四章 PEH蛋白转化DON效果的检测及转化条件的优化 | 第59-69页 |
| 摘要 | 第59-60页 |
| 1 材料 | 第60页 |
| ·主要试剂 | 第60页 |
| ·主要仪器设备 | 第60页 |
| 2 方法 | 第60-62页 |
| ·pEH蛋白转化DON效果的检测(高效液相色谱法) | 第60-61页 |
| ·pEH蛋白转化DON条件的优化 | 第61-62页 |
| 3 结果 | 第62-65页 |
| ·DON标准曲线的绘制 | 第62-63页 |
| ·HPLC检测样品DON浓度 | 第63-64页 |
| ·初酶液对DON转化率的测定 | 第64页 |
| ·不同破壁方式条件下初酶液转化DON效果的比较 | 第64页 |
| ·不同温度条件下初酶液转化DON效果的比较 | 第64-65页 |
| ·金属离子对转化DON效果的影响 | 第65页 |
| 4 讨论 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-68页 |
| 英文摘要 | 第68-69页 |
| 全文总结 | 第69-71页 |
| 附录 | 第71-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
