不同来源5-氨基乙酰丙酸合成酶的表达、酶学性质研究及其应用
| 致谢 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-22页 |
| ·引言 | 第13页 |
| ·ALA在农业和医药领域的应用 | 第13-15页 |
| ·ALA在农业领域的应用 | 第13-15页 |
| ·ALA在医药领域的应用 | 第15页 |
| ·ALA的生物合成途径 | 第15-16页 |
| ·ALA的生物合成策略 | 第16-20页 |
| ·诱变育种与培养条件优化 | 第16-18页 |
| ·代谢工程法 | 第18-20页 |
| ·本研究的工作思路及拟研究内容 | 第20-22页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第22-34页 |
| ·菌株和质粒 | 第22页 |
| ·仪器与试剂 | 第22-23页 |
| ·实验仪器 | 第22-23页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第23页 |
| ·培养基与培养条件 | 第23-25页 |
| ·培养基及前体 | 第23-24页 |
| ·工程菌的培养条件 | 第24-25页 |
| ·检测与分析方法 | 第25-34页 |
| ·分子克隆相关实验 | 第25页 |
| ·pH的测定 | 第25页 |
| ·大肠杆菌细胞密度测定 | 第25页 |
| ·甘油含量的测定 | 第25-27页 |
| ·工程菌的超声破碎及胞内蛋白提取 | 第27页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第27页 |
| ·SDS-PAGE蛋白电泳 | 第27页 |
| ·5-氨基乙酰丙酸(ALA)的测定 | 第27-29页 |
| ·ALAS的分离纯化 | 第29-31页 |
| ·ALAS比活力的测定 | 第31-34页 |
| 第三章 HEMA基因的胞内表达 | 第34-52页 |
| ·引言 | 第34-35页 |
| ·材料和方法 | 第35-41页 |
| ·菌株和质料 | 第35-36页 |
| ·培养基及培养条件 | 第36页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第36-37页 |
| ·质粒DNA的提取及转化 | 第37页 |
| ·DNA的纯化、回收和检测 | 第37页 |
| ·细菌基因组DNA的提取 | 第37页 |
| ·荚膜红细菌和大豆根瘤菌hemA基因的PCR扩增 | 第37-38页 |
| ·嗜酸柏拉红菌和脱氮副球菌hemA的基因全合成 | 第38-39页 |
| ·重组质粒的构建 | 第39-40页 |
| ·ALAS的诱导表达 | 第40-41页 |
| ·工程菌摇瓶发酵产ALA | 第41页 |
| ·测定方法 | 第41页 |
| ·结果与讨论 | 第41-50页 |
| ·荚膜红细菌和大豆根瘤菌基因组的提取 | 第41-42页 |
| ·荚膜红细菌和大豆根瘤菌hemA基因的PCR扩增 | 第42页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第42-44页 |
| ·hemA基因序列的分析 | 第44-47页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及SDS-PAGE | 第47-49页 |
| ·重组ALAS融合蛋白活性的检测 | 第49-50页 |
| ·工程菌的摇瓶发酵 | 第50页 |
| ·小结 | 第50-52页 |
| 第四章 重组ALAS的纯化及酶学性质对比研究 | 第52-64页 |
| ·引言 | 第52-53页 |
| ·材料和方法 | 第53-56页 |
| ·实验菌株 | 第53页 |
| ·主要试剂 | 第53页 |
| ·重组ALAS的诱导表达 | 第53页 |
| ·重组ALAS的分离纯化 | 第53-54页 |
| ·重组ALAS基本酶学性质的测定 | 第54-56页 |
| ·测定方法 | 第56页 |
| ·结果和讨论 | 第56-62页 |
| ·重组RC-ALAS的分离纯化 | 第56页 |
| ·重组ALAS的基本酶学性质 | 第56-62页 |
| ·小结 | 第62-64页 |
| 第五章 工程菌合成ALA的放大实验 | 第64-71页 |
| ·引言 | 第64-65页 |
| ·材料和方法 | 第65-67页 |
| ·菌种及培养基 | 第65页 |
| ·培养条件 | 第65-66页 |
| ·分析检测方法 | 第66-67页 |
| ·结果和讨论 | 第67-70页 |
| ·重组酶RC-ALAS诱导表达条件的优化 | 第67-69页 |
| ·工程菌发酵合成ALA的放大实验 | 第69-70页 |
| ·小结 | 第70-71页 |
| 第六章 结论和展望 | 第71-74页 |
| ·结论 | 第71-73页 |
| ·展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-84页 |
| 作者简介 | 第84页 |
