| 缩略语 | 第1-14页 |
| 摘要 | 第14-15页 |
| ABSTRACT | 第15-17页 |
| 第一章 综述 | 第17-31页 |
| ·引言 | 第17-22页 |
| ·中心蛋白的结构 | 第17-20页 |
| ·中心蛋白的功能 | 第20-22页 |
| ·中心蛋白的磷酸化 | 第22-28页 |
| ·蛋白质磷酸化概述 | 第22-23页 |
| ·蛋白磷酸化后的信号网络 | 第23-24页 |
| ·蛋白质磷酸化位点 | 第24-25页 |
| ·蛋白激酶以及催化机理 | 第25-28页 |
| ·中心蛋白聚集性质的研究 | 第28-29页 |
| ·本课题研究的意义 | 第29-31页 |
| 第二章 中心蛋白的构建、表达及纯化 | 第31-41页 |
| ·引言 | 第31页 |
| ·实验材料 | 第31-34页 |
| ·菌种和质粒 | 第31页 |
| ·寡核苷酸 | 第31-32页 |
| ·主要酶和生化试剂 | 第32页 |
| ·主要试剂的配制 | 第32-34页 |
| ·实验方法 | 第34-37页 |
| ·重组质粒的构建 | 第34-36页 |
| ·中心蛋白的表达和纯化 | 第36-37页 |
| ·实验结果 | 第37-39页 |
| ·重组质粒的构建 | 第37-38页 |
| ·中心蛋白C-端半分子的诱导表达和纯化鉴定 | 第38-39页 |
| ·结论 | 第39-41页 |
| 第三章 中心蛋白C-端半分子同金属离子的作用研究 | 第41-49页 |
| ·引言 | 第41页 |
| ·实验材料 | 第41-42页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·实验仪器 | 第41-42页 |
| ·实验方法 | 第42页 |
| ·Sm~(3+)溶液的制备 | 第42页 |
| ·TNS溶液的制备 | 第42页 |
| ·光谱测定 | 第42页 |
| ·结果与讨论 | 第42-47页 |
| ·Sm~(3+)对C-EoCen构象的影响 | 第42-44页 |
| ·Sm~(3+)与C-EoCen的结合常数 | 第44-47页 |
| ·结论 | 第47-49页 |
| 第四章 中心蛋白C-端半分子的磷酸化 | 第49-59页 |
| ·引言 | 第49页 |
| ·实验材料 | 第49-50页 |
| ·实验试剂 | 第49-50页 |
| ·实验仪器 | 第50页 |
| ·实验方法 | 第50-52页 |
| ·Mg~(2+)溶液(33mM 100 mL)的配制 | 第50页 |
| ·Ca~(2+)溶液(0.144 M,100 mL)的配制 | 第50页 |
| ·Tb~(3+)溶液的配制 | 第50-51页 |
| ·Tris-Hcl(50mM,100mL) | 第51页 |
| ·ATP溶液配制(100mM,100mL) | 第51页 |
| ·中心蛋白脱钙方法 | 第51页 |
| ·中心蛋白浓度测定方法 | 第51页 |
| ·中心蛋白磷酸化的方法 | 第51页 |
| ·金属离子对中心蛋白的磷酸化实验方法 | 第51页 |
| ·SDS-PAGE和Native-PAGE(聚丙烯酸胺凝胶电泳)分析 | 第51页 |
| ·15%天然胶(Native-PAGE)检测 | 第51-52页 |
| ·结果与讨论 | 第52-57页 |
| ·Native-PAGE(非变性聚丙烯酰胺凝胶)分析 | 第52页 |
| ·中心蛋白C端半分子磷酸化条件选择 | 第52-54页 |
| ·Ca~(2+)、Tb~(3+)、Gd~(3+)对C-EoCen磷酸化的影响 | 第54-56页 |
| ·疏水性荧光探针TNS分析 | 第56-57页 |
| ·结论 | 第57-59页 |
| 第五章 中心蛋白C端半分子聚集性质研究 | 第59-69页 |
| ·引言 | 第59页 |
| ·实验材料 | 第59-60页 |
| ·主要试剂 | 第59-60页 |
| ·实验仪器 | 第60页 |
| ·实验方法 | 第60-61页 |
| ·Mg~(2+)溶液(33mM 100 mL)的配制 | 第60页 |
| ·Tb~(3+)溶液的配制 | 第60页 |
| ·Tris-Hcl(50mM,100mL) | 第60页 |
| ·ATP溶液配制(100mM,100mL) | 第60页 |
| ·中心蛋白脱钙方法 | 第60页 |
| ·中心蛋白浓度测定方法 | 第60页 |
| ·中心蛋白磷酸化的方法 | 第60页 |
| ·金属离子对中心蛋白的化学交联实验方法 | 第60-61页 |
| ·SDS-PAGE和Native-PAGE(聚丙烯酸胺凝胶电泳)分析 | 第61页 |
| ·结果与讨论 | 第61-67页 |
| ·C端中心蛋白聚集非变性聚丙烯酰胺凝胶分析 | 第61页 |
| ·C-EoCen蛋白聚集条件优化 | 第61-64页 |
| ·Tb~(3+)、Gd~(3+)对中心蛋白C端聚集的影响 | 第64-65页 |
| ·磷酸化中心蛋白的C端半分子聚集Native-PAGE分析 | 第65页 |
| ·疏水性荧光探针TNS分析 | 第65-67页 |
| ·结论 | 第67-69页 |
| 第六章 总结与展望 | 第69-71页 |
| ·工作总结 | 第69页 |
| ·展望 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-82页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-85页 |
| 个人简况及联系方式 | 第85-87页 |
