| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-22页 |
| ·PED 概述 | 第12-14页 |
| ·流行病学 | 第12-13页 |
| ·临床症状 | 第13页 |
| ·发病机理 | 第13页 |
| ·病理变化 | 第13页 |
| ·组织嗜性和免疫机制 | 第13-14页 |
| ·免疫防治措施 | 第14页 |
| ·诊断 | 第14页 |
| ·PEDV 的生物学特性 | 第14-18页 |
| ·PEDV 病毒粒子的形态结构 | 第14-15页 |
| ·PEDV 理化特性 | 第15页 |
| ·PEDV 抗原性 | 第15页 |
| ·PEDV 病毒学分类 | 第15-16页 |
| ·PEDV 细胞培养特性 | 第16页 |
| ·PEDV 基因组结构 | 第16页 |
| ·PEDV 基因组编码蛋白及其功能 | 第16-18页 |
| ·非结构蛋白及其功能 | 第16-17页 |
| ·结构蛋白及其功能 | 第17-18页 |
| ·冠状病毒及其蛋白与宿主细胞周期相互作用的研究进展 | 第18-20页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第20-22页 |
| 第二章 感染猪流行性腹泻病毒对 VERO E6 细胞周期的影响 | 第22-35页 |
| 摘要 | 第22-23页 |
| ·材料与方法 | 第23-28页 |
| ·病毒与细胞株 | 第23页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第23页 |
| ·PEDV 的培养 | 第23页 |
| ·细胞周期的检测 | 第23-24页 |
| ·细胞的化学处理及检测 | 第24页 |
| ·病毒 RNA 的提取 | 第24页 |
| ·病毒 RNA 的反转录 | 第24-25页 |
| ·病毒载量的检测 | 第25页 |
| ·数据的处理和分析 | 第25页 |
| ·相对荧光定量对细胞周期因子及相关因子的检测 | 第25-28页 |
| ·荧光定量引物的设计 | 第25-26页 |
| ·细胞总 RNA 的提取与反转录 | 第26页 |
| ·常规 PCR 鉴定 | 第26页 |
| ·PCR 产物的胶回收 | 第26页 |
| ·纯化产物与载体的连接 | 第26-27页 |
| ·连接产物的的转化 | 第27页 |
| ·重组质粒的提取 | 第27页 |
| ·荧光定量 PCR 标准品的制备及标准曲线的建立 | 第27-28页 |
| ·荧光定量 PCR 细胞培养物样品检测 | 第28页 |
| ·数据处理与分析 | 第28页 |
| ·结果 | 第28-33页 |
| ·细胞周期的检测 | 第28-30页 |
| ·化学药物处理细胞 | 第30页 |
| ·绝对荧光定量 PCR 的方法检测病毒载量的变化 | 第30-31页 |
| ·相对荧光定量 PCR 方法检测细胞周期调控因子的变化 | 第31-33页 |
| ·讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 猪流行性腹泻病毒 N 蛋白核仁定位信号对细胞周期的影响 | 第35-43页 |
| 摘要 | 第35页 |
| ·材料、仪器和方法 | 第35-39页 |
| ·质粒和细胞 | 第35页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第35-36页 |
| ·真核表达质粒的构建 | 第36-38页 |
| ·目的基因引物的设计 | 第36页 |
| ·目的基因的扩增 | 第36页 |
| ·N1 和 N2 基因 PCR 扩增产物的纯化回收 | 第36-37页 |
| ·dN 基因的扩增 | 第37页 |
| ·N 基因和 dN 基因扩增基因产物的纯化回收 | 第37页 |
| ·N 基因、dN 基因和载体的酶切连接 | 第37页 |
| ·转化 | 第37页 |
| ·质粒的提取与鉴定 | 第37-38页 |
| ·阳性质粒的大量提取 | 第38页 |
| ·重组质粒转染 Vero E6 细胞 | 第38页 |
| ·激光共聚焦显微镜分析 | 第38-39页 |
| ·流式细胞仪检测细胞周期的变化 | 第39页 |
| ·结果 | 第39-41页 |
| ·N 基因和 dN 基因的获得 | 第39页 |
| ·激光共聚焦显微镜分析重组质粒表达的蛋白在细胞中的定位情况 | 第39-40页 |
| ·细胞流式仪检测转染细胞的周期变化 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| 第四章 全文结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 作者简历 | 第51页 |
