| 目录 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 符号说明 | 第13-14页 |
| 第一篇 文献综述 | 第14-46页 |
| 第一章 猪繁殖与呼吸综合征及其病原的分子生物学研究进展 | 第14-28页 |
| 1 病毒概述 | 第14-15页 |
| 2 基因组 | 第15页 |
| 3 非结构蛋白与结构蛋白 | 第15-18页 |
| 4 基因组复制与亚基因组转录 | 第18-19页 |
| 5 PRRSV免疫与疫苗研制 | 第19-20页 |
| 6 诊断 | 第20-21页 |
| 7 小结与讨论 | 第21页 |
| 参考文献 | 第21-28页 |
| 第二章 单股正链RNA病毒5'UTR顺式作用元件的研究进展 | 第28-36页 |
| 1 结构 | 第28-29页 |
| 2 功能 | 第29-30页 |
| 3 问题与讨论 | 第30-31页 |
| 参考文献 | 第31-36页 |
| 第三章 猪繁殖与呼吸综合征病毒基因表达调控序列的初步解析 | 第36-46页 |
| 1 PRRSV 5’UTR病毒复制过程调控因子的界定 | 第36-39页 |
| 2 PRRSV 3’UTR病毒复制过程调控因子的界定 | 第39-40页 |
| 3 POLY(A)对PRRSV复制的影响及复制起始位点的界定 | 第40页 |
| 4 PRRSV的转录调控机制的研究 | 第40-42页 |
| 5 高致病性PRRSV复制调控机制的研究 | 第42页 |
| 6 展望 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-46页 |
| 第二篇 试验研究 | 第46-132页 |
| 第四章 猪繁殖与呼吸综合征病毒5’非翻译区存在与病毒感染性相关的顺式作用元件 | 第46-78页 |
| 摘要 | 第46页 |
| ABSTRACT | 第46-47页 |
| 前言 | 第47-49页 |
| 1 材料与方法 | 第49-61页 |
| ·病毒和细胞 | 第49页 |
| ·试剂 | 第49页 |
| ·主要仪器 | 第49-50页 |
| ·通过突变PCR构建5’末端系列缺失突变体 | 第50-55页 |
| ·转染和病毒拯救 | 第55-57页 |
| ·间接免疫荧光 | 第57页 |
| ·5 ’RACE,RT-PCR和序列测定 | 第57-60页 |
| ·病毒空斑形态 | 第60页 |
| ·第一轮病毒滴定和突变病毒的生长曲线 | 第60页 |
| ·RNA杂交 | 第60-61页 |
| ·RNA二级结构预测分析 | 第61页 |
| 2 结果 | 第61-71页 |
| ·PRRSV基因组5’末端的反向遗传操作 | 第61-64页 |
| ·PRRSV 5’末端前三个核苷酸对病毒粒子的活力是非必需的 | 第64页 |
| ·病毒5’末端前16个核苷酸可以被改变而不影响其感染性 | 第64-67页 |
| ·改变的5’末端区域被外源AU-rich序列所修复 | 第67-68页 |
| ·末端修复的突变病毒遗传稳定 | 第68-70页 |
| ·由序列形成的结构元件而不是初级序列才是调控PRRSV复制的关键 | 第70-71页 |
| 3 讨论 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-78页 |
| 第五章 PRRSV 5’UTR 5’端序列缺失突变体外源序列修复分析 | 第78-92页 |
| 摘要 | 第78页 |
| ABSTRACT | 第78-79页 |
| 前言 | 第79-80页 |
| 1 材料与方法 | 第80-84页 |
| ·材料 | 第80页 |
| ·方法 | 第80-84页 |
| 2 结果 | 第84-89页 |
| ·重组突变质粒的构建 | 第84-85页 |
| ·突变病毒的拯救,5’端原缺失序列出现AU-rich修复序列 | 第85-86页 |
| ·拯救病毒的5’端AU-rich修复序列在传代过程中能够稳定存在 | 第86-87页 |
| ·突变体与亲本病毒基因组复制,亚基因组转录的分析比较 | 第87-88页 |
| ·突变病毒与野毒在病毒生物学水平的比较 | 第88页 |
| ·突变病毒与野毒5’UTR二级结构预测分析 | 第88-89页 |
| 3 讨论 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-92页 |
| 第六章 Ⅰ型5’UTR在功能上可以完全替代Ⅱ型5’UTR发挥作用 | 第92-116页 |
| 摘要 | 第92页 |
| ABSTRACT | 第92-93页 |
| 前言 | 第93-94页 |
| 1 材料与方法 | 第94-103页 |
| ·细胞与病毒 | 第94页 |
| ·试剂 | 第94页 |
| ·主要仪器 | 第94页 |
| ·突变中间质粒的构建 | 第94-98页 |
| ·质粒转染和病毒拯救 | 第98-99页 |
| ·5’RACE,RT-PCR和全长测序 | 第99-100页 |
| ·亚基因组及负链基因组检测 | 第100-102页 |
| ·拯救病毒的滴定 | 第102页 |
| ·病毒空斑形态 | 第102-103页 |
| ·Northern杂交 | 第103页 |
| ·RNA二级结构的预测 | 第103页 |
| 2 结果 | 第103-111页 |
| ·PRRSV Ⅰ型和Ⅱ型的5’UTR中有保守区存在,且它们拥有相似的二级结构 | 第103-105页 |
| ·突变全长cDNA克隆的构建以及病毒拯救 | 第105-107页 |
| ·嵌合病毒与亲本病毒拥有相似的生物特性,嵌合病毒的RNA组份用Ⅰ型和Ⅱ型的探针都可以检测到 | 第107-109页 |
| ·Ⅱ型的5’UTR的功能可完全被Ⅰ型所替换,且突变序列遗传稳定 | 第109-110页 |
| ·Nde Ⅰ的插入对突变体的遗传稳定性无影响 | 第110页 |
| ·5’UTR的替换会造成vAPLV5中其他位点的突变 | 第110-111页 |
| 3 讨论 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-116页 |
| 第七章 异源5’非翻译区在猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性拯救过程中的功能解析 | 第116-132页 |
| 摘要 | 第116页 |
| ABSTRACT | 第116-117页 |
| 前言 | 第117-118页 |
| 1 材料与方法 | 第118-124页 |
| ·材料 | 第118-119页 |
| ·方法 | 第119-124页 |
| 2 结果 | 第124-128页 |
| ·vAPLV5全长测序发现Nsp9位置出现4处突变位点引发有义突变 | 第124页 |
| ·嵌合衍生突变病毒的构建 | 第124-125页 |
| ·嵌合衍生突变病毒较嵌合亲本病毒更早产生CPE | 第125-126页 |
| ·突变病毒与野毒的基因组复制与亚基因组转录的分析比较 | 第126-127页 |
| ·突变病毒与野毒在病毒生物学水平的比较 | 第127-128页 |
| ·突变病毒与野毒在亚基因组合成水平的分析比较 | 第128页 |
| 3 讨论 | 第128-129页 |
| 参考文献 | 第129-132页 |
| 全文总结 | 第132-134页 |
| 致谢 | 第134-136页 |
| 作者简介 | 第136-138页 |
