| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 引言 | 第13-27页 |
| ·牛基因组学的研究 | 第13-16页 |
| ·基因组遗传图谱 | 第13页 |
| ·基因组物理图谱 | 第13-14页 |
| ·基因组DNA测序 | 第14页 |
| ·功能基因组学研究 | 第14-16页 |
| ·基因表达谱 | 第16-23页 |
| ·二代测序技术基础的基因芯片表达谱 | 第16-19页 |
| ·数字基因表达谱 | 第19-23页 |
| ·GRK2基因概述 | 第23-25页 |
| ·G蛋白偶联受体激酶 | 第23-24页 |
| ·蛋白激酶家族 | 第24页 |
| ·βARKs | 第24-25页 |
| ·GRK2相关功能 | 第25页 |
| ·研究的目的与意义 | 第25-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-54页 |
| ·实验动物的选取 | 第27页 |
| ·奶牛乳腺组织获取及总RNA提取 | 第27-29页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第27页 |
| ·主要仪器 | 第27-28页 |
| ·乳腺组织的获取 | 第28页 |
| ·RNA提取 | 第28页 |
| ·RNA质量检测 | 第28-29页 |
| ·数字基因表达谱检测 | 第29-30页 |
| ·实验材料 | 第29页 |
| ·实验设备与试剂 | 第29页 |
| ·实验步骤 | 第29-30页 |
| ·数字基因表达谱数据分析 | 第30-33页 |
| ·原始数据处理 | 第31页 |
| ·测序质量评估 | 第31页 |
| ·测序饱和度分析 | 第31页 |
| ·实验重复性分析 | 第31页 |
| ·Clean Tag拷贝数分布统计 | 第31页 |
| ·基因表达注释 | 第31-32页 |
| ·差异表达基因的筛选 | 第32页 |
| ·反义链转录分析 | 第32页 |
| ·新转录本的检测 | 第32页 |
| ·GO功能显著性富集分析 | 第32-33页 |
| ·Pathway显著性富集分析 | 第33页 |
| ·荧光定量RT-PCR验证 | 第33-37页 |
| ·基因选取及引物设计 | 第33-35页 |
| ·cDNA的生成 | 第35-36页 |
| ·引物效果验证 | 第36-37页 |
| ·实时荧光定量PCR反应 | 第37页 |
| ·奶牛乳腺组织的获取及上皮细胞的培养 | 第37-40页 |
| ·主要试剂及配制方法 | 第37-39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| ·用于细胞培养的乳腺组织的获取 | 第39页 |
| ·乳腺上皮细胞的原代培养 | 第39页 |
| ·细胞传代及纯化 | 第39-40页 |
| ·乳腺上皮细胞鉴定 | 第40页 |
| ·功能基因的筛选 | 第40-41页 |
| ·GRK2在不同状态的奶牛乳腺组织中的表达 | 第40-41页 |
| ·GRK2基因过表达检验基因功能 | 第41-52页 |
| ·引物设计及PCR扩增 | 第41-43页 |
| ·克隆载体构建 | 第43-45页 |
| ·pGCMV/IRES/EGFP真核表达载体构建 | 第45-47页 |
| ·重组质粒载体转染奶牛乳腺上皮细胞 | 第47-48页 |
| ·转染后荧光基团的检测 | 第48页 |
| ·荧光定量RT-PCR检测GRK2过表达效果 | 第48页 |
| ·Western blotting检测GRK2过表达对泌乳功能的影响 | 第48-52页 |
| ·GRK2基因沉默检验基因功能 | 第52-54页 |
| ·主要试剂 | 第52页 |
| ·主要仪器 | 第52页 |
| ·细胞转染 | 第52-53页 |
| ·干扰效率的观察 | 第53页 |
| ·荧光定量RT-PCR检测GRK2沉默效果 | 第53页 |
| ·Western blotting检测GRK2沉默对泌乳功能的影响 | 第53-54页 |
| 3 结果 | 第54-85页 |
| ·奶牛乳腺组织RNA提取质量检验结果 | 第54-55页 |
| ·数字基因表达谱检测结果 | 第55-57页 |
| ·差异表达基因 | 第55-56页 |
| ·Gene Ontology结果 | 第56-57页 |
| ·Pathway分析结果 | 第57页 |
| ·新转录本的检测结果 | 第57页 |
| ·Real-Time荧光定量PCR验证结果 | 第57-66页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞的培养 | 第66-67页 |
| ·原代和传代细胞培养 | 第66页 |
| ·乳腺上皮细胞的鉴定 | 第66-67页 |
| ·GRK2基因的筛选 | 第67-69页 |
| ·GRK2基因在各组奶牛乳腺组织中的表达 | 第67-69页 |
| ·GRK2过表达功能检验结果 | 第69-79页 |
| ·GRK2基因PCR扩增结果 | 第69-70页 |
| ·GRK2克隆载体构建结果 | 第70-71页 |
| ·GRK2表达载体构建结果 | 第71-73页 |
| ·GRK2过表达效果检验 | 第73-74页 |
| ·蛋白质水平检测GRK2过表达对泌乳调控的影响 | 第74-79页 |
| ·GRK2基因沉默功能检验结果 | 第79-85页 |
| ·GRK2干扰效果检验 | 第79-80页 |
| ·蛋白质水平检测GRK2沉默对泌乳调控的影响 | 第80-85页 |
| 4 讨论 | 第85-90页 |
| ·奶牛乳腺数字基因表达谱 | 第85-87页 |
| ·荧光定量RT-PCR验证 | 第87页 |
| ·Gene Ontology分析 | 第87-88页 |
| ·Pathway分析 | 第88页 |
| ·GRK2对乳腺上皮细胞泌乳功能的影响 | 第88-90页 |
| 5 结论 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-98页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第98页 |