| 致谢 | 第4-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-20页 |
| 1.1 紫花苜蓿的利用及其营养价值 | 第10-12页 |
| 1.1.1 紫花苜蓿青饲利用 | 第10页 |
| 1.1.2 紫花苜蓿青干草和草粉的利用 | 第10-11页 |
| 1.1.3 青贮苜蓿的利用 | 第11-12页 |
| 1.2 苜蓿的秋眠性 | 第12页 |
| 1.3 光调控苜蓿秋眠的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.4 苜蓿秋眠性相关基因研究进展 | 第13-18页 |
| 1.4.1 FAR1基因研究进展 | 第13-14页 |
| 1.4.2 PYL8基因研究进展 | 第14-15页 |
| 1.4.3 GATA12基因研究进展 | 第15-18页 |
| 1.4.3.1 GATA转录因子对种子萌发和幼苗生长的影响 | 第16页 |
| 1.4.3.2 对植物形态建成的调控 | 第16-17页 |
| 1.4.3.3 影响分生组织细胞分化和叶片的发育 | 第17页 |
| 1.4.3.4 对成花的调控 | 第17-18页 |
| 1.4.3.5 GATA转录因子对胁迫的响应 | 第18页 |
| 1.5 农杆菌介导的植物转基因 | 第18-20页 |
| 2 引言 | 第20-21页 |
| 3 试验一紫花苜蓿MsFAR1、MsPYL8和MsGATA12基因的表达特性 | 第21-38页 |
| 3.1 试验材料 | 第21-23页 |
| 3.1.1 实验设备 | 第21页 |
| 3.1.2 植物材料 | 第21页 |
| 3.1.3 载体和菌株 | 第21页 |
| 3.1.4 主要试剂和试剂盒 | 第21-23页 |
| 3.2 实验方法 | 第23-28页 |
| 3.2.1 胁迫处理和样本的采集 | 第23页 |
| 3.2.1.1 苜蓿种子的种植 | 第23页 |
| 3.2.1.2 胁迫处理苜蓿幼苗 | 第23页 |
| 3.2.1.2 大田苜蓿采样 | 第23页 |
| 3.2.2 RNA的提取 | 第23-24页 |
| 3.2.3 RNA质量检测和浓度的测定 | 第24页 |
| 3.2.4 RNA反转录cDNA | 第24-25页 |
| 3.2.5 目的基因引物设计 | 第25页 |
| 3.2.6 目的基因的克隆和测序 | 第25-27页 |
| 3.2.6.1 目的基因的克隆 | 第25-26页 |
| 3.2.6.2 目的基因PCR产物回收 | 第26页 |
| 3.2.6.3 目的基因片段连接T载体 | 第26-27页 |
| 3.2.6.4 连接产物转化DH5α 大肠杆菌感受态细胞 | 第27页 |
| 3.2.7 荧光定量PCR | 第27-28页 |
| 3.3 结果与分析 | 第28-33页 |
| 3.3.1 提取的RNA质量和浓度检测 | 第28页 |
| 3.3.2 目的基因的扩增与测序结果 | 第28-29页 |
| 3.3.3 基因表达量分析 | 第29-33页 |
| 3.3.3.1 MsFAR1基因表达量分析 | 第29-30页 |
| 3.3.3.2 MsPYL8基因表达量分析 | 第30-31页 |
| 3.3.3.3 MsGATA12基因表达量分析 | 第31-33页 |
| 3.4 讨论 | 第33-38页 |
| 3.4.2 MsPYL8基因表达量结果讨论 | 第34-35页 |
| 3.4.3 MsGATA12基因表达量结果讨论 | 第35-38页 |
| 4 试验二MsGATA12过表达载体的构建和苜蓿遗传转化 | 第38-50页 |
| 4.1 试验材料 | 第38-40页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第38页 |
| 4.1.2 载体和菌株的选择 | 第38页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第38-39页 |
| 4.1.4 仪器设备 | 第39-40页 |
| 4.2 试验方法 | 第40-45页 |
| 4.2.1 实验所需试剂的配置 | 第40页 |
| 4.2.2 GATA12过表达载体的构建 | 第40-44页 |
| 4.2.2.1 GATA12完整CDS区引物设计 | 第40-41页 |
| 4.2.2.2 PCR克隆MsGATA12基因CDS区 | 第41页 |
| 4.2.2.3 回收后DNA片段与克隆载体pMD18-T连接 | 第41-42页 |
| 4.2.2.4 连接产物转化DH5α 大肠杆菌感受态细胞 | 第42页 |
| 4.2.2.5 菌液鉴定及质粒的提取和鉴定 | 第42页 |
| 4.2.2.6 Nco I和Pml I双酶切 | 第42-43页 |
| 4.2.2.7 连接和重组载体的鉴定 | 第43页 |
| 4.2.2.8 重组质粒转化农杆菌GV4404感受态细胞 | 第43-44页 |
| 4.2.3 紫花苜蓿的遗传转化 | 第44页 |
| 4.2.3.1 农杆菌的复苏 | 第44页 |
| 4.2.3.2 紫花苜蓿外植体的制备 | 第44页 |
| 4.2.3.3 农杆菌介导的紫花苜蓿遗传转化 | 第44页 |
| 4.2.4 转基因苜蓿的鉴定 | 第44-45页 |
| 4.2.4.1 再生苜蓿DNA提取 | 第44-45页 |
| 4.2.4.2 转基因苜蓿的分子鉴定 | 第45页 |
| 4.3 结果与分析 | 第45-48页 |
| 4.3.1 MsGATA12基因的比对及CDS区全长的扩增及鉴定 | 第45-46页 |
| 4.3.2 pMD18-GATA12和pCAMBIA3301空载体双酶切结果 | 第46页 |
| 4.3.3 连接和重组载体的鉴定 | 第46-47页 |
| 4.3.4 重组质粒转化农杆菌GV4404感受态细胞鉴定 | 第47页 |
| 4.3.5 转基因苜蓿的鉴定 | 第47-48页 |
| 4.4 讨论 | 第48-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| 6 展望 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-63页 |
| 英文摘要 | 第63-64页 |
