| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 目录 | 第11-19页 |
| 名词缩写表 | 第19-20页 |
| 第1章 绪论 | 第20-47页 |
| ·甾体化合物概述 | 第20-23页 |
| ·甾体化合物的微生物转化研究 | 第23-25页 |
| ·甾体化合物微生物转化 | 第23-24页 |
| ·甾体化合物微生物转化的特点 | 第24-25页 |
| ·甾体化合物微生物转化的类型 | 第25-31页 |
| ·几种重要的甾体微生物转化反应 | 第27-30页 |
| ·甾体化合物微生物转化的工艺 | 第30页 |
| ·典型的甾体药物的转化工艺 | 第30-31页 |
| ·微生物降解植物甾醇侧链 | 第31-35页 |
| ·原料来源 | 第31-33页 |
| ·雄甾烯二酮 | 第33页 |
| ·微生物降解甾醇的机理 | 第33-35页 |
| ·微生物降解甾醇侧链生成雄甾烯酮 | 第33-34页 |
| ·微生物降解甾醇母核 | 第34-35页 |
| ·微生物降解甾醇侧链的国内外研究现状 | 第35-45页 |
| ·雄甾烯酮产生菌的选育和改良 | 第36-38页 |
| ·水相体系的转化 | 第38-41页 |
| ·增加底物的溶解性 | 第38-40页 |
| ·改变细胞壁(膜)的通透性 | 第40页 |
| ·解除产物的抑制 | 第40-41页 |
| ·两相体系中转化 | 第41-44页 |
| ·有机溶剂-水两相系统 | 第41-42页 |
| ·双水相系统 | 第42-43页 |
| ·浊点系统 | 第43-44页 |
| ·固定化细胞转化技术 | 第44-45页 |
| ·本研究的目的和内容 | 第45-47页 |
| ·研究目的 | 第45页 |
| ·研究内容 | 第45-47页 |
| 第2章 雄甾-4-烯-3,17-二酮转化菌的分离和鉴定 | 第47-59页 |
| ·材料与仪器 | 第47-49页 |
| ·主要材料与试剂 | 第47-48页 |
| ·主要仪器与设备 | 第48页 |
| ·培养基 | 第48-49页 |
| ·实验方法 | 第49-53页 |
| ·培养条件 | 第49页 |
| ·分析测定方法 | 第49-50页 |
| ·薄层层析法(TLC) | 第49-50页 |
| ·高效液相色谱法(HPLC) | 第50页 |
| ·AD转化率的计算 | 第50页 |
| ·AD和ADD标准曲线的绘制 | 第50-52页 |
| ·菌种鉴定 | 第52-53页 |
| ·形态特征 | 第52页 |
| ·菌株的生理生化特征 | 第52页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第52页 |
| ·PCR扩增 | 第52-53页 |
| ·序列分析和系统发育树的构建 | 第53页 |
| ·结果与分析 | 第53-58页 |
| ·发酵产物的检测分析 | 第53-54页 |
| ·菌株ZJUVN的鉴定 | 第54-58页 |
| ·菌株ZJUVN的形态 | 第54-55页 |
| ·需氧特性及最适生长温度 | 第55页 |
| ·菌株ZJUVN的生理生化特征 | 第55页 |
| ·菌株ZJUVN的16S rDNA分析 | 第55-58页 |
| ·琼脂糖电泳和基因测序 | 第55-57页 |
| ·序列分析 | 第57-58页 |
| ·小结 | 第58-59页 |
| 第3章 新金分枝杆菌ZJUVN的诱变选育研究 | 第59-68页 |
| ·材料与仪器 | 第60-61页 |
| ·主要材料与试剂 | 第60页 |
| ·主要仪器与设备 | 第60页 |
| ·微生物菌株与培养基 | 第60-61页 |
| ·出发菌株 | 第60页 |
| ·培养基 | 第60-61页 |
| ·实验方法 | 第61-62页 |
| ·出发菌株生长情况 | 第61页 |
| ·离子注入诱变工艺 | 第61-62页 |
| ·注入方式 | 第61页 |
| ·平板分离和筛选 | 第61-62页 |
| ·存活率的计算 | 第62页 |
| ·诱变菌株遗传稳定性实验 | 第62页 |
| ·结果与分析 | 第62-66页 |
| ·出发菌株的生长情况 | 第62-63页 |
| ·N~+离子束注入诱变条件的选择 | 第63-64页 |
| ·N~+离子束注入诱变筛选结果 | 第64页 |
| ·突变株传代稳定性研究 | 第64-65页 |
| ·突变株ZJUVN-08的保藏 | 第65页 |
| ·出发菌株与诱变株M.neoaurum ZJUVN-08的性能研究与比较 | 第65-66页 |
| ·出发菌株与诱变株M.neoaurum ZJUVN-08生长情况比较 | 第65-66页 |
| ·出发菌株与诱变株M.neoaurum ZJUVN-08转化能力比较 | 第66页 |
| ·讨论与小结 | 第66-68页 |
| ·讨论 | 第66-67页 |
| ·小结 | 第67-68页 |
| 第4章 菌株ZJUVN-08转化植物甾醇发酵条件的优化及产物的提取、纯化和鉴定 | 第68-91页 |
| ·材料与仪器 | 第68-69页 |
| ·菌种 | 第68-69页 |
| ·材料与试剂 | 第69页 |
| ·主要仪器与设备 | 第69页 |
| ·培养基 | 第69页 |
| ·实验方法 | 第69-73页 |
| ·生物量的测定 | 第69页 |
| ·转化培养方法 | 第69-70页 |
| ·培养基组成的优化 | 第70-71页 |
| ·碳源种类对发酵的影响 | 第70页 |
| ·氮源种类对发酵的影响 | 第70页 |
| ·磷酸盐对发酵的影响 | 第70页 |
| ·无机盐对发酵的影响 | 第70页 |
| ·培养基组成的正交实验优化 | 第70-71页 |
| ·培养条件的优化 | 第71页 |
| ·培养基的初始pH值对发酵的影响 | 第71页 |
| ·培养温度对发酵的影响 | 第71页 |
| ·接种量对转化的影响 | 第71页 |
| ·摇瓶装液量对发酵的影响 | 第71页 |
| ·转速对发酵的影响 | 第71页 |
| ·产物的分离提取 | 第71-72页 |
| ·产物的结构鉴定 | 第72-73页 |
| ·结果与分析 | 第73-89页 |
| ·培养基组成的优化 | 第73-78页 |
| ·碳源种类 | 第73-74页 |
| ·氮源种类 | 第74-75页 |
| ·磷酸盐种类 | 第75页 |
| ·无机盐 | 第75-76页 |
| ·培养基组成的正交实验优化 | 第76-78页 |
| ·培养条件的优化 | 第78-83页 |
| ·初始pH值 | 第78-79页 |
| ·培养温度 | 第79-80页 |
| ·接种量 | 第80-81页 |
| ·摇瓶装液量 | 第81-82页 |
| ·转速 | 第82页 |
| ·培养条件优化综合验证实验 | 第82-83页 |
| ·发酵液转化产物的分析 | 第83-85页 |
| ·转化产物的提取分离及结构鉴定 | 第85-89页 |
| ·讨论与小结 | 第89-91页 |
| ·讨论 | 第89-90页 |
| ·小结 | 第90-91页 |
| 第5章 细胞通透性调节对菌株ZJUVN-08转化植物甾醇的影响 | 第91-107页 |
| ·材料与仪器 | 第91-92页 |
| ·菌种来源 | 第91-92页 |
| ·材料与试剂 | 第92页 |
| ·主要仪器与设备 | 第92页 |
| ·培养基 | 第92页 |
| ·实验方法 | 第92-95页 |
| ·不同超声处理对菌体生长和AD产量的影响 | 第92-93页 |
| ·不同浓度杆菌肽对菌体生长和AD产量的影响 | 第93页 |
| ·不同浓度鱼精蛋白对菌体生长和AD产量的影响 | 第93-94页 |
| ·不同浓度甘氨酸对菌体生长和AD产量的影响 | 第94页 |
| ·药敏性实验 | 第94页 |
| ·甘氨酸处理后的菌体透射电镜观察 | 第94-95页 |
| ·结果与分析 | 第95-105页 |
| ·超声处理对菌体生长和AD产量的影响 | 第95-97页 |
| ·不同浓度的杆菌肽对菌体生长和AD产量的影响 | 第97-99页 |
| ·不同浓度的鱼精蛋白对菌体生长和AD产量的影响 | 第99-101页 |
| ·不同浓度的甘氨酸对菌体生长和AD产量的影响 | 第101-103页 |
| ·药敏性实验 | 第103-104页 |
| ·甘氨酸处理后菌体的透射电镜观察 | 第104-105页 |
| ·讨论与小结 | 第105-107页 |
| ·讨论 | 第105-106页 |
| ·小结 | 第106-107页 |
| 第6章 助溶剂对M.neoaurum ZJUVN-08生长细胞转化植物甾醇合成AD的影响 | 第107-124页 |
| ·材料与仪器 | 第107-108页 |
| ·主要材料与试剂 | 第107-108页 |
| ·主要仪器与设备 | 第108页 |
| ·培养基 | 第108页 |
| ·试验方法 | 第108-111页 |
| ·亲水性有机溶剂对植物甾醇微生物转化的影响 | 第108页 |
| ·表面活性剂对植物甾醇微生物转化的影响 | 第108-109页 |
| ·环糊精对植物甾醇微生物转化的影响 | 第109页 |
| ·HP-β-CD对M neoaurum ZJUVN-08生长的影响 | 第109页 |
| ·添加HP-β-CD的水相体系中植物甾醇微生物转化过程的优化实验设计 | 第109-111页 |
| ·转化培养方法 | 第109-110页 |
| ·部分因子实验设计(FFD) | 第110页 |
| ·中心组合实验设计(CCD) | 第110页 |
| ·数据分析 | 第110页 |
| ·植物甾醇微生物转化验证试验 | 第110-111页 |
| ·结果与分析 | 第111-121页 |
| ·亲水性有机溶剂对植物甾醇微生物转化的影响 | 第111页 |
| ·表面活性剂对植物甾醇微生物转化的影响 | 第111-112页 |
| ·环糊精对植物甾醇微生物转化的影响 | 第112-114页 |
| ·添加HP-β-CD对发酵液中菌体生长的影响 | 第114页 |
| ·添加HP-β-CD的植物甾醇微生物转化体系的优化 | 第114-121页 |
| ·部分因子试验(FFD) | 第115-117页 |
| ·中心组合试验(CCD) | 第117-120页 |
| ·微生物转化植物甾醇合成AD的过程验证 | 第120-121页 |
| ·讨论与小结 | 第121-124页 |
| ·讨论 | 第121-122页 |
| ·小结 | 第122-124页 |
| 第7章 M.neoaurum ZJUVN-08静息细胞转化植物甾醇合成AD | 第124-134页 |
| ·材料与仪器 | 第124-125页 |
| ·主要材料与试剂 | 第124-125页 |
| ·主要仪器与设备 | 第125页 |
| ·培养基 | 第125页 |
| ·实验方法 | 第125-132页 |
| ·静息细胞培养法 | 第125页 |
| ·转化产物的测定 | 第125-126页 |
| ·结果与分析 | 第126-132页 |
| ·菌龄对静息细胞转化植物甾醇的影响 | 第126-127页 |
| ·转化时间对静息细胞转化植物甾醇的影响 | 第127页 |
| ·缓冲液的pH值对静息细胞转化植物甾醇的影响 | 第127-129页 |
| ·缓冲液的浓度对静息细胞转化植物甾醇的影响 | 第129页 |
| ·细胞浓度对静息细胞转化植物甾醇的影响 | 第129-130页 |
| ·外源添加辅酶对静息细胞转化植物甾醇的影响 | 第130-131页 |
| ·静息细胞可重复次数 | 第131-132页 |
| ·讨论与小结 | 第132-134页 |
| ·讨论 | 第132页 |
| ·小结 | 第132-134页 |
| 第8章 结论与展望 | 第134-136页 |
| ·主要结论 | 第134-135页 |
| ·主要创新结果 | 第135页 |
| ·后续研究展望 | 第135-136页 |
| 参考文献 | 第136-146页 |
| 致谢 | 第146-147页 |
| 附：个人简介及攻读博士学位期间的科研成果 | 第147页 |
