未培养海洋微生物延胡索酸还原酶的基因克隆、表达及生化性质鉴定
| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-26页 |
| ·导论 | 第13页 |
| ·延胡索酸还原酶的分类 | 第13页 |
| ·膜结合型延胡索酸还原酶的结构特点 | 第13-15页 |
| ·延胡索酸还原酶的应用 | 第15-17页 |
| ·延胡索酸还原酶的产物—琥珀酸 | 第15-16页 |
| ·延胡索酸还原酶基因治疗疾病 | 第16-17页 |
| ·延胡索酸还原酶的研究现状 | 第17-23页 |
| ·大肠杆菌延胡索酸还原酶 | 第18-19页 |
| ·嗜热自养甲烷杆菌 | 第19-20页 |
| ·嗜热产氢杆菌属中的延胡索酸还原酶 | 第20-21页 |
| ·利什曼原虫属中的延胡索酸还原酶 | 第21页 |
| ·布氏锥虫中的延胡索酸还原酶 | 第21-22页 |
| ·其他微生物中的延胡索酸还原酶 | 第22-23页 |
| ·本实验研究背景及意义 | 第23-24页 |
| ·本课题实验思路 | 第24-26页 |
| 第二章 材料与方法 | 第26-38页 |
| ·实验材料 | 第26-27页 |
| ·文库来源 | 第26页 |
| ·菌株、质粒和蛋白质 | 第26-27页 |
| ·培养条件 | 第27页 |
| ·菌种保藏 | 第27页 |
| ·实验仪器及设备 | 第27-28页 |
| ·药品以及试剂配制 | 第28-30页 |
| ·实验药品和试剂 | 第28-29页 |
| ·实验试剂的配制 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-38页 |
| ·小剂量质粒DNA提取 | 第30-31页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第31页 |
| ·PCR扩增目的基因片段 | 第31-32页 |
| ·DNA片段分离与纯化 | 第32页 |
| ·DNA双酶切 | 第32-33页 |
| ·目的基因与表达质粒连接 | 第33页 |
| ·重组质粒化学转化 | 第33页 |
| ·感受态细胞制备 | 第33-34页 |
| ·粗蛋白液制备 | 第34-35页 |
| ·粗蛋白液制备 | 第35页 |
| ·目的蛋白纯化 | 第35页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第35-36页 |
| ·酶活测定 | 第36-38页 |
| 第三章 延胡索酸还原酶新基因的生物信息学分析 | 第38-49页 |
| ·引言 | 第38页 |
| ·基因测序结果 | 第38-39页 |
| ·相似性分析 | 第39-40页 |
| ·核酸序列相似性分析 | 第40页 |
| ·氨基酸序列相似性分析 | 第40页 |
| ·Frd1A蛋白理化性质预测 | 第40-41页 |
| ·Frd1A蛋白信号肽预测 | 第41页 |
| ·Frd1A蛋白跨膜结构预测 | 第41-42页 |
| ·Frd1A蛋白亲疏水性预测 | 第42-43页 |
| ·Frd1A蛋白功能结构域预测 | 第43-44页 |
| ·Frd1A蛋白活性位点分析 | 第44页 |
| ·Frd1A蛋白系统进化关系 | 第44-45页 |
| ·Frd1A蛋白多重序列比对结果 | 第45-47页 |
| ·Frd1A蛋白二级结构预测 | 第47-48页 |
| ·总结 | 第48-49页 |
| 第四章 延胡索酸还原酶的克隆、表达及生化性质鉴定 | 第49-63页 |
| ·引言 | 第49页 |
| ·延胡索酸还原酶的克隆及重组质粒构建 | 第49-52页 |
| ·frd1A基因的克隆 | 第49-50页 |
| ·重组质粒构建 | 第50-52页 |
| ·重组蛋白Frd1A的表达 | 第52-55页 |
| ·诱导表达重组质粒 | 第53-54页 |
| ·纯化重组蛋白 | 第54-55页 |
| ·重组蛋白Frd1A的生化性质鉴定 | 第55-61页 |
| ·HPLC测定反应体系中的产物 | 第55页 |
| ·最适pH | 第55-56页 |
| ·最适温度 | 第56-57页 |
| ·酶活力测定 | 第57页 |
| ·重组蛋白Frd1A对温度稳定性的测定 | 第57-58页 |
| ·重组蛋白Frd1A对pH稳定性的测定 | 第58-59页 |
| ·金属离子对重组蛋白Frd1A酶活力的影响 | 第59-60页 |
| ·EDTA对重组蛋白Frd1A酶活力的影响 | 第60-61页 |
| ·重组蛋白Frd1A动力学参数测定 | 第61页 |
| ·总结 | 第61-63页 |
| 第五章 讨论与展望 | 第63-68页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| ·生物信息学结果分析 | 第63-64页 |
| ·frd1A基因克隆、表达结果分析 | 第64页 |
| ·重组蛋白Frd1A生化性质鉴定结果分析 | 第64-65页 |
| ·展望 | 第65-68页 |
| ·本研究的前景与优势 | 第65-66页 |
| ·存在的问题 | 第66页 |
| ·进一步研究方向 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 致谢 | 第76-78页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第78页 |
