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诱导型Ds转座载体的构建及其在拟南芥和玉米中的应用

中文摘要第1-10页
Abstract第10-12页
1 前言第12-25页
   ·Ac/Ds 转座系统第13-15页
     ·Ac/Ds 转座系统组成第13-14页
     ·Ac/Ds 转座系统的应用第14-15页
     ·Ac/Ds 转座系统所面临的问题第15页
   ·诱导系统应用第15-19页
     ·乙醇诱导系统的组成第16-17页
     ·乙醇诱导系统的原理第17页
     ·乙醇诱导系统的优点第17-18页
     ·乙醇诱导系统的缺点第18页
     ·乙醇诱导系统的应用第18-19页
   ·乙醇诱导的 Ac/Ds 转座系统第19-20页
     ·乙醇诱导的 Ac/Ds 转座系统的作用原理第19-20页
     ·乙醇诱导的 Ac/Ds 转座系统的意义第20页
   ·地塞米松诱导系统第20-22页
     ·地塞米松诱导系统原理第20-21页
     ·地塞米松诱导系统的应用第21-22页
     ·地塞米松诱导系统的缺陷第22页
   ·地塞米松诱导的 Ac/Ds 转座系统第22-23页
     ·地塞米松诱导的 Ac/Ds 转座系统的作用原理第22-23页
     ·地塞米松诱导的 Ac/Ds 转座系统的意义第23页
   ·诱导型载体在玉米中的使用第23页
   ·本研究的目的和意义第23-25页
2 材料和方法第25-41页
   ·实验材料第25-26页
     ·植物材料第25页
     ·菌株和载体第25页
     ·酶及生化试剂第25页
     ·PCR 引物第25页
     ·培养基第25页
     ·GUS 染色液第25-26页
   ·实验方法第26-41页
     ·质粒 DNA 的提取第26-27页
       ·碱法小量提取质粒 DNA第26页
       ·试剂盒质粒微量提取方案第26-27页
     ·电泳目的片段的回收第27-28页
     ·DNA 片段与载体的连接第28页
       ·DNA 片段与克隆载体的连接第28页
       ·DNA 片段与表达载体的连接第28页
     ·大肠杆菌感受态细胞制备第28-29页
     ·大肠杆菌感受态细胞的转化第29页
     ·根癌农杆菌 LBA4404/GV3101 感受态细胞的制备第29页
     ·冻融法转化农杆菌第29-30页
     ·拟南芥 DNA 提取第30页
       ·CTAB 法提取拟南芥基因组总 DNA第30页
     ·拟南芥 RNA 提取第30-31页
       ·利用 TRIZOL 法提取 RNA第30-31页
       ·cDNA 第一条链的合成第31页
     ·定量 RT-PCR 分析第31-32页
     ·乙醇诱导第32页
     ·地塞米松诱导第32页
     ·Tail-PCR第32-34页
     ·反向 PCR第34-36页
     ·接头 PCR第36-37页
     ·巢式 PCR第37-38页
     ·GUS 染色第38-39页
     ·农杆菌介导的玉米遗传转化第39-41页
3 结果与分析第41-51页
   ·乙醇诱导型表达载体 pHL1 功能验证第41-46页
     ·乙醇诱导功能验证第41页
     ·Ds 转座功能验证第41-43页
       ·GUS 染色验证 Ds 转座功能第42页
       ·利用巢式 PCR 分析 Ds 元件的转座第42-43页
     ·Ds-GFP 插入位点的分析第43-46页
       ·T-DNA 旁翼序列分析第43-45页
       ·Ds-GFP 插入位点的分析第45-46页
   ·地塞米松诱导型表达载体 pHL2 功能验证第46-48页
     ·Ds 转座功能验证第46-47页
     ·Ds-GFP 插入位点的分析第47-48页
       ·T-DNA 旁翼序列分析第47-48页
       ·Ds-GFP 插入位点的分析第48页
   ·表达载体 pHL1 转化玉米第48-51页
4 讨论第51-54页
5 结论第54-55页
参考文献第55-61页
附录第61-68页
 附录一:玉米 IPT2 基因在玉米中的微量及根特异性表达分析第61-66页
 附录二:本文涉及到的基因及引物信息第66-67页
 附录三:玉米组培培养基第67-68页
致谢第68页

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