| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-26页 |
| ·mTOR信号通路概述 | 第13-14页 |
| ·mTOR的结构 | 第13页 |
| ·mTOR信号通路 | 第13-14页 |
| ·Rheb研究进展 | 第14-17页 |
| ·Rheb的结构 | 第15-16页 |
| ·Rheb的功能 | 第16-17页 |
| ·FKBP38研究进展 | 第17-19页 |
| ·FKBP38的结构 | 第17-18页 |
| ·FKBP38的功能 | 第18-19页 |
| ·Rheb与FKBP38相互关系的研究现状 | 第19-20页 |
| ·Rheb与FKBP38具有相互作用 | 第19-20页 |
| ·Rheb与FKBP38没有相互作用 | 第20页 |
| ·蛋白质组学研究方法概述 | 第20-21页 |
| ·免疫共沉淀 | 第20-21页 |
| ·酵母双杂交 | 第21页 |
| ·质谱 | 第21页 |
| 参考文献 | 第21-26页 |
| 第二章 绒山羊Rheb和FKBP38基因克隆与表达模式分析 | 第26-34页 |
| ·材料 | 第26-27页 |
| ·菌株和质粒 | 第26页 |
| ·动物细胞培养条件 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·主要实验仪器 | 第27页 |
| ·主要溶液及其配制 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-29页 |
| ·总RNA提取及cDNA第一链合成 | 第27-28页 |
| ·Rheb与FKBP38引物设计及基因克隆 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的构建及鉴定 | 第29页 |
| ·生物信息学分析 | 第29页 |
| ·组织表达特异性检测 | 第29页 |
| ·结果 | 第29-33页 |
| ·基因cDNA克隆与序列测定 | 第29-31页 |
| ·组织特异性表达 | 第31-33页 |
| ·讨论 | 第33-34页 |
| 第三章 Rheb与FKBP38之间关系的免疫共沉淀研究 | 第34-43页 |
| ·材料 | 第34-36页 |
| ·动物细胞培养条件 | 第34页 |
| ·主要试剂、载体及抗体 | 第34页 |
| ·主要溶液及其配制 | 第34-36页 |
| ·方法 | 第36-38页 |
| ·细胞培养 | 第36页 |
| ·绒山羊真核表达载体pIRES2-EGFP-Rheb、pIRES2-DsRed2-FKBP38的构建 | 第36-37页 |
| ·绒山羊真核表达载体pIRES2-EGFP-Rheb、pIRES2-DsRed2-FKBP38共转染GFb细胞 | 第37-38页 |
| ·蛋白提取 | 第38页 |
| ·免疫共沉淀 | 第38页 |
| ·Western Blot分析 | 第38页 |
| ·结果 | 第38-41页 |
| ·绒山羊真核表达载体pIRES2-EGFP-Rheb、pIRES2-DsRed2-FKBP38的构建 | 第38-39页 |
| ·绒山羊真核表达载体pIRES2-EGFP-Rheb、pIRES2-DsRed2-FKBP38共转染GFb细胞系的筛选 | 第39-40页 |
| ·免疫共沉淀复合物中Rheb和FKBP38的Western Blot鉴定 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| 第四章 酵母双杂交技术鉴定Rheb和FKBP38之间的相互关系 | 第43-56页 |
| ·材料 | 第43-45页 |
| ·菌株和质粒 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·主要溶液及其配制 | 第43-45页 |
| ·方法 | 第45-48页 |
| ·Rheb和FKBP38酵母双杂交诱饵表达载体和靶载体的构建及鉴定 | 第45-47页 |
| ·pGBKT7空载体、pGBKT7-Rheb、pGBKT7-FKBP38转化酵母菌Y2HGold及重组靶载体pGADT7空载体、pGADT7-Rheb和pGADT7-FKBP38转化酵母菌Y187 | 第47页 |
| ·菌落PCR鉴定及Y2HGold中重组诱饵表达质粒的毒性与自激活验证 | 第47页 |
| ·酵母交配 | 第47-48页 |
| ·验证蛋白之间的相互作用 | 第48页 |
| ·结果 | 第48-55页 |
| ·Rheb和FKBP38酵母双杂交诱饵表达载体和靶载体的构建 | 第48-50页 |
| ·诱饵载体转化酵母菌Y2HGold和重组靶载体转化酵母菌Y187 | 第50页 |
| ·转化菌的PCR鉴定 | 第50-51页 |
| ·重组诱饵表达载体pGBKT7-Rheb/FKBP38的毒性与自激活检测 | 第51-52页 |
| ·酵母双杂交筛选及Rheb和FKBP38相互关系鉴定 | 第52-55页 |
| ·讨论 | 第55-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第58页 |
