雷竹PvFT1基因的生物学功能分析
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 目录 | 第6-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-18页 |
| ·FT基因的结构 | 第11页 |
| ·FT基因的功能 | 第11-13页 |
| ·FT基因的在花发育过程中的功能 | 第11-12页 |
| ·FT基因在植物其他发育过程中的功能 | 第12-13页 |
| ·FT基因与其他基因的互作 | 第13-15页 |
| ·FT基因受外界环境的影响 | 第15-16页 |
| ·FT受光周期的影响 | 第15页 |
| ·FT在春化途径中的作用 | 第15页 |
| ·FT与赤霉素独自调控开花 | 第15-16页 |
| ·竹子成花机理研究现状 | 第16页 |
| ·研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| ·技术路线 | 第17-18页 |
| 第二章 雷竹PvFT1基因的转基因功能验证 | 第18-30页 |
| ·材料与方法 | 第18-25页 |
| ·材料及试剂 | 第18-19页 |
| ·植物材料 | 第18页 |
| ·试剂和菌种 | 第18页 |
| ·引物序列 | 第18-19页 |
| ·实验方法 | 第19-25页 |
| ·农杆菌感受态制备 | 第19页 |
| ·农杆菌电转化和鉴定 | 第19-20页 |
| ·质粒提取 | 第20页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第20-21页 |
| ·连接产物转化及阳性克隆筛选 | 第21页 |
| ·菌落检测及测序 | 第21页 |
| ·序列分析 | 第21页 |
| ·植物表达载体的遗传转化 | 第21-23页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第23页 |
| ·基因组DNAPCR验证 | 第23-24页 |
| ·总RNA提取 | 第24页 |
| ·cDNA的合成 | 第24-25页 |
| ·RT-PCR | 第25页 |
| ·结果与分析 | 第25-28页 |
| ·表达载体转化农杆菌 | 第25-26页 |
| ·水稻基因组DNA提取结果 | 第26页 |
| ·目的基因PCR验证结果 | 第26-27页 |
| ·转基因及野生型水稻叶片RNA提取结果 | 第27页 |
| ·目的基因在转基因水稻中的表达分析 | 第27-28页 |
| ·异位表达目的基因的表型 | 第28页 |
| ·讨论 | 第28-30页 |
| ·成花素与FT | 第28-29页 |
| ·转基因苗的验证及表型观察 | 第29-30页 |
| 第三章 雷竹PvFT1蛋白的亚细胞定位 | 第30-37页 |
| ·材料与方法 | 第30-33页 |
| ·材料与试剂 | 第30页 |
| ·实验方法 | 第30-33页 |
| ·限制性内切酶的选择 | 第30页 |
| ·引物设计 | 第30-31页 |
| ·质粒提取 | 第31页 |
| ·高保真片段扩增 | 第31页 |
| ·质粒及PCR产物酶切 | 第31-32页 |
| ·电泳条带回收 | 第32页 |
| ·回收PCR片段与回收表达载体片段连接 | 第32页 |
| ·连接产物转化及菌落检测及测序 | 第32页 |
| ·洋葱表皮细胞的准备 | 第32页 |
| ·基因枪轰击 | 第32-33页 |
| ·荧光显微镜观察 | 第33页 |
| ·结果与分析 | 第33-36页 |
| ·高保真酶PCR扩增结果 | 第33-34页 |
| ·pCHF3载体以及PCR产物双酶切结果 | 第34页 |
| ·表达载体构建及检测 | 第34-35页 |
| ·基因枪轰击后荧光表达观测 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36-37页 |
| ·表达载体构建 | 第36页 |
| ·亚细胞定位 | 第36-37页 |
| 第四章 PvFT1蛋白的原核表达 | 第37-43页 |
| ·材料与方法 | 第37-39页 |
| ·材料和试剂 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-39页 |
| ·限制性内切酶的选择 | 第37页 |
| ·引物设计 | 第37页 |
| ·质粒提取 | 第37页 |
| ·高保真片段扩增 | 第37-38页 |
| ·载体及PCR产物酶切 | 第38页 |
| ·电泳条带回收及后续工作 | 第38页 |
| ·连接产物转化入DE3及阳性克隆筛选 | 第38页 |
| ·原核表达 | 第38-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-41页 |
| ·PvFT1基因片段的克隆 | 第39页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第39-40页 |
| ·PvFT1基因的原核转化子检测 | 第40页 |
| ·PvFT1的原核表达 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| ·PvFT1基因的原核表达 | 第41-42页 |
| ·包涵体的形成 | 第42-43页 |
| 第五章 雷竹PvFT1基因启动子活性分析 | 第43-56页 |
| ·材料与方法 | 第43-48页 |
| ·材料与试剂 | 第43页 |
| ·载体和菌株 | 第43页 |
| ·植株和试剂 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-48页 |
| ·PvFT1启动子扩增引物设计 | 第43-44页 |
| ·PvFT1启动子的扩增 | 第44页 |
| ·连接 | 第44页 |
| ·转化及后续步骤 | 第44页 |
| ·PvFT1基因启动子及其基因组全长扩增引物设计 | 第44-45页 |
| ·PvFT1基因启动子及其基因组全长的扩增 | 第45页 |
| ·PvFT1基因全长电泳条带回收及后续步骤 | 第45页 |
| ·PvFT1基因缺失元件启动子扩增的引物设计 | 第45-46页 |
| ·缺失元件的启动子片段扩增 | 第46页 |
| ·质粒提取 | 第46页 |
| ·质粒及PCR产物酶切 | 第46-47页 |
| ·电泳条带回收及后续工作 | 第47页 |
| ·农杆菌电转化和鉴定 | 第47页 |
| ·农杆菌侵染 | 第47页 |
| ·转化苗的抗生素筛选 | 第47页 |
| ·GUS染色 | 第47-48页 |
| ·结果与分析 | 第48-54页 |
| ·PvFT1启动子扩增 | 第48-49页 |
| ·启动子序列分析 | 第49-50页 |
| ·PvFT1基因启动子及其基因组全长序列的扩增 | 第50-51页 |
| ·PvFT1基因拷贝数的确定 | 第51页 |
| ·启动子不同缺失片段扩增结果 | 第51-52页 |
| ·pC1301载体双酶切 | 第52-53页 |
| ·表达载体构建及检测 | 第53页 |
| ·表达载体转化农杆菌及GUS染色结果 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-56页 |
| ·启动子分析 | 第54-55页 |
| ·缺失元件的启动子表达分析 | 第55-56页 |
| 第六章 结论与展望 | 第56-58页 |
| ·研究结论 | 第56页 |
| ·研究展望 | 第56-58页 |
| 附录 | 第58-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 个人简历 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
