| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-21页 |
| 1.酵母双杂交系统 | 第8-9页 |
| ·酵母双杂交系统的基本原理 | 第8-9页 |
| ·酵母双杂交系统的应用 | 第9页 |
| 2.动物细胞程序性死亡/细胞凋亡 | 第9-17页 |
| ·细胞凋亡特点 | 第10页 |
| ·细胞凋亡途径 | 第10-14页 |
| ·死亡受体途径 | 第11-12页 |
| ·线粒体途径 | 第12-13页 |
| ·内质网途径 | 第13-14页 |
| ·凋亡调控基因 | 第14-17页 |
| 3.酵母细胞程序性死亡 | 第17-18页 |
| 4.抗凋亡基因的文库筛选 | 第18-20页 |
| ·抗凋亡基因的文库筛选原理 | 第18-19页 |
| ·抗凋亡基因的文库筛选方法 | 第19-20页 |
| 5.本研究的提出 | 第20-21页 |
| 第二章 材料和方法 | 第21-37页 |
| 1.材料 | 第21页 |
| ·质粒 | 第21页 |
| ·菌株 | 第21页 |
| 2.方法 | 第21-33页 |
| ·分子克隆方法 | 第21-30页 |
| ·质粒提取 | 第21-22页 |
| ·DNA电泳 | 第22页 |
| ·质粒DNA纯化 | 第22-23页 |
| ·DNA酶切 | 第23页 |
| ·载体脱磷 | 第23页 |
| ·DNA片段回收 | 第23-24页 |
| ·DNA连接 | 第24页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR)及其引物设计 | 第24-26页 |
| ·感受态细胞制备 | 第26-27页 |
| ·大肠杆菌转化(热击法) | 第27页 |
| ·大肠杆菌转化(电转化) | 第27-28页 |
| ·蛋白质电泳(SDS-PAGE) | 第28-29页 |
| ·Western blot | 第29-30页 |
| ·酵母实验方法 | 第30-33页 |
| ·酵母转化 | 第30-31页 |
| ·酵母细胞总DNA提取 | 第31-32页 |
| ·酵母蛋白抽提 | 第32页 |
| ·菌种保存 | 第32页 |
| ·酵母点样 | 第32-33页 |
| 3 培养基和实验试剂 | 第33-37页 |
| ·YPD(Yeast extract Peptone and Dextrose) | 第33页 |
| ·SD/gal/raf | 第33页 |
| ·SD/glu | 第33页 |
| ·质粒小提试剂 | 第33-34页 |
| ·PBS缓冲液 | 第34页 |
| ·蜗牛酶 | 第34页 |
| ·磷酸钾缓冲液 | 第34页 |
| ·Lyticase | 第34页 |
| ·蛋白质提取试剂 | 第34-35页 |
| ·SDS-PAGE有关溶液 | 第35-37页 |
| 第三章 结果与分析 | 第37-64页 |
| 1.表达载体pJG45-PpBI-1和pGilda-Bax的构建 | 第37-38页 |
| 2.含Bax基因的载体导入酵母BF264—15Dau中 | 第38页 |
| 3.文库的扩增 | 第38页 |
| 4.文库的筛选 | 第38-40页 |
| 5.筛选获得菌株的生长鉴定 | 第40-41页 |
| 6.转化菌株Bax基因的PCR验证 | 第41-42页 |
| 7.cDNA片段的PCR验证 | 第42-43页 |
| 8.文库片段回收 | 第43-44页 |
| 9.测序 | 第44-51页 |
| 10.序列比对和分析 | 第51-54页 |
| 11.筛选到的菌株抗性验证 | 第54-56页 |
| 12.菌株抗性机理分析 | 第56-64页 |
| ·文库质粒丢失筛选 | 第56-57页 |
| ·文库丢失质粒菌株的PCR验证 | 第57-58页 |
| ·文库质粒丢失后的抗性验证 | 第58-59页 |
| ·基因转化验证 | 第59-64页 |
| ·获得特定cDNA文库质粒 | 第60页 |
| ·电转化大肠杆菌JM109 | 第60-61页 |
| ·筛选出带有文库质粒的大肠杆菌JM109 | 第61-62页 |
| ·含特定文库cDNA质粒转化酵母 | 第62-63页 |
| ·点样实验 | 第63-64页 |
| 第四章 讨论 | 第64-69页 |
| 1、抗凋亡基因的筛选 | 第64页 |
| 2、文库筛选应注意的问题 | 第64-65页 |
| ·质粒构建与选择 | 第64-65页 |
| ·鉴定和验证 | 第65页 |
| ·菌种保存 | 第65页 |
| 3、转化子筛选及其抗性的机制 | 第65-68页 |
| 4、需深入开展的工作 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
