| 目录 | 第1-7页 |
| 图表索引 | 第7-12页 |
| 中文摘要 | 第12-14页 |
| Abstract | 第14-16页 |
| 前言 | 第16-25页 |
| 1. 肿瘤血管生成 | 第16-19页 |
| ·肿瘤血管生成的启动 | 第16-17页 |
| ·肿瘤血管的形成 | 第17-18页 |
| ·肿瘤血管的特点 | 第18-19页 |
| 2. 血管生成相关细胞因子 | 第19-20页 |
| ·bFGF(basic fibroblast growth factor) | 第19页 |
| ·VEGF(Vascular endothelial growth factor) | 第19-20页 |
| ·CCL2 (C-C motif Chemokine ligand 2) | 第20页 |
| 3. 基质金属蛋白酶(metalloproteinases,MMPs)与肿瘤血管生成 | 第20-21页 |
| 4. 肿瘤血管形成相关调控基因 | 第21-23页 |
| ·P53基因 | 第21-22页 |
| ·HIF-1a(hypoxia-inducible factor 1a)基因 | 第22页 |
| ·STAT3(Signal transducer and activator of transcription 3)基因 | 第22-23页 |
| 5. Gadd45a功能简介 | 第23页 |
| 6. 本文研究目标 | 第23-25页 |
| 材料与方法 | 第25-50页 |
| 1. 实验材料 | 第25-36页 |
| ·菌种、质粒和细胞株 | 第25-26页 |
| ·实验动物 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26-28页 |
| ·引物的合成与设计 | 第28-30页 |
| ·小干扰RNA(siRNA)的合成 | 第30页 |
| ·主要仪器设备 | 第30-31页 |
| ·生物学软件 | 第31页 |
| ·常用试剂的配制 | 第31-36页 |
| 2. 实验方法 | 第36-50页 |
| ·细胞的处理 | 第36-37页 |
| ·细胞瞬时转染 | 第37页 |
| ·细胞总RNA和总蛋白的提取 | 第37-38页 |
| ·蛋白和RNA浓度测定 | 第38-39页 |
| ·逆转录(Reverse Transcription,RT)与PCR扩增 | 第39-40页 |
| ·Western Blot | 第40-41页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第41页 |
| ·细菌的转化 | 第41-42页 |
| ·质粒提取及鉴定 | 第42-44页 |
| ·蛋白的原核表达纯化及检测 | 第44页 |
| ·GST-Pull Down试验 | 第44-45页 |
| ·免疫共沉淀(Immunoprecipitation,IP)试验 | 第45页 |
| ·免疫荧光(Immunofluoresence,IF) | 第45页 |
| ·条件培养基的浓缩与分析 | 第45-46页 |
| ·内皮细胞成管试验 | 第46-47页 |
| ·内皮细胞迁移实验 | 第47页 |
| ·鸡胚尿囊膜实验(Chick Chorioallantoic Membrane Assay) | 第47页 |
| ·裸鼠移植瘤实验 | 第47-48页 |
| ·免疫组织化学 | 第48页 |
| ·统计分析 | 第48-50页 |
| 实验结果 | 第50-79页 |
| 1. MEFs Gadd45a -/-和MEFs Gadd45a +/+细胞系的鉴定 | 第50-51页 |
| 2. Gadd45a敲除促进体内肿瘤血管生成 | 第51-54页 |
| ·Gadd45a敲除促进移植瘤的生长 | 第51-52页 |
| ·Gadd45a敲除的移植瘤微血管密度增高 | 第52-54页 |
| 3. Gadd45a敲除增强鸡胚尿囊膜血管生成反应 | 第54-55页 |
| 4. 人脐静脉内皮(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC)的鉴定 | 第55-56页 |
| 5. Gadd45a敲除细胞的条件培养基促进HUVECs的迁移与成管能力 | 第56-59页 |
| ·Gadd45a敲除细胞的条件培养基促进HUVECs的迁移能力 | 第56-57页 |
| ·Gadd45a敲除细胞的条件培养基促进HUVECs的成管能力 | 第57-59页 |
| 6. Gadd45a敲降细胞的条件培养基促进HUVECs的迁移与成管能力 | 第59-63页 |
| ·Gadd45a敲降效率检测 | 第59-60页 |
| ·Gadd45a敲降的HeLa细胞条件培养基促进HUVECs的迁移能力 | 第60-61页 |
| ·Gadd45a敲降的HeLa细胞条件培养基促进HUVECs的成管能力 | 第61-63页 |
| 7. MEF Gadd45a +/+和MEF Gadd45a -/-细胞表达谱差异分析 | 第63-64页 |
| 8. Gadd45a表达下降诱导VEGF-A和MMP3表达升高 | 第64-67页 |
| ·Gadd45a敲除可诱导VEGF-A和MMP3表达升高 | 第64-66页 |
| ·Gadd45a敲降可诱导VEGF-A和MMP3表达升高 | 第66-67页 |
| 9. 条件培养基中MMP3和VEGF-A含量分析 | 第67-70页 |
| ·Gadd45a敲除细胞条件培养基中VEGF-A和MMP3水平升高 | 第68-69页 |
| ·Gadd45a敲降细胞条件培养基中VEGF-A和MMP3水平升高 | 第69-70页 |
| 10. Gadd45a表达降低可增强STAT3 Ser727磷酸化 | 第70-73页 |
| ·Gadd45a敲除可诱导STAT3 Ser727位点磷酸化水平升高 | 第70-71页 |
| ·Gadd45a调控STAT3 Ser727位点磷酸化水平 | 第71-73页 |
| 11. Gadd45a通过mTOR/STAT3通路调节STAT3 Ser727磷酸化 | 第73-79页 |
| ·Rapamycin抑制STAT3 Ser727位点磷酸化 | 第73-75页 |
| ·Gadd45a参与抑制mTOR与STAT3的相互作用 | 第75-79页 |
| 讨论 | 第79-85页 |
| 1. Gadd45a的表达与肿瘤的发生发展 | 第80-82页 |
| ·Gadd45a与基因组稳定性 | 第80-81页 |
| ·Gadd45a与肿瘤侵袭转移 | 第81页 |
| ·Gadd45a与肿瘤血管生成 | 第81-82页 |
| 2. Gadd45a参与调节VEGF-A和MMP3表达 | 第82页 |
| 3. Gadd45a调节STAT3磷酸化 | 第82-83页 |
| 4. Gadd45a对mTOR/STAT3通路的调节 | 第83-84页 |
| 5. 展望 | 第84-85页 |
| 小结 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-94页 |
| 博士在读期间发表与待发表论文 | 第94-95页 |
| 文献综述 | 第95-105页 |
| 参考文献 | 第101-105页 |
| 致谢 | 第105-107页 |
