乙烯对麦冬光合作用的影响及相关基因的克隆
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 缩略词 | 第12-14页 |
| 1 综述 | 第14-33页 |
| ·乙烯的研究进展 | 第14-20页 |
| ·乙烯的生物合成 | 第14-15页 |
| ·乙烯的生物合成途径 | 第14页 |
| ·乙烯生物合成的关键酶 | 第14-15页 |
| ·乙烯的信号转导 | 第15-16页 |
| ·乙烯反应突变体 | 第15-16页 |
| ·乙烯受体蛋白 | 第16页 |
| ·乙烯的信号转导 | 第16页 |
| ·乙烯的生理作用及应用 | 第16-20页 |
| ·改变生长习性 | 第16-18页 |
| ·促进果实成熟 | 第18-19页 |
| ·促进叶片衰老和器官脱落 | 第19页 |
| ·诱导不定根的发生和植株分蘖 | 第19-20页 |
| ·促进次生物质的合成与排出 | 第20页 |
| ·增加黄瓜雌花 | 第20页 |
| ·麦冬的研究进展 | 第20-23页 |
| ·遗传多样性研究 | 第21-22页 |
| ·核型分析 | 第22页 |
| ·耐盐性研究 | 第22-23页 |
| ·耐荫性研究 | 第23页 |
| ·差异表达基因克隆的常见方法 | 第23-31页 |
| ·差异显示技术(DDRT-PCR) | 第23-24页 |
| ·代表性差异分析法(RDA) | 第24页 |
| ·基因芯片 | 第24-25页 |
| ·抑制性差减杂交(SSH)技术 | 第25-31页 |
| ·SSH的基本原理 | 第25页 |
| ·SSH技术的主要过程 | 第25-27页 |
| ·SSH技术的特点 | 第27-28页 |
| ·SSH在动植物上的应用 | 第28-31页 |
| ·本研究的意义、内容与技术路线 | 第31-33页 |
| ·目的与意义 | 第31页 |
| ·研究内容 | 第31-32页 |
| ·技术路线 | 第32-33页 |
| 2 乙烯对麦冬光合作用的影响 | 第33-42页 |
| ·材料与方法 | 第33页 |
| ·材料与试剂 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33页 |
| ·麦冬光响应曲线的测定 | 第33页 |
| ·麦冬CO_2响应曲线的测定 | 第33页 |
| ·乙烯对麦冬光合速率影响的测定 | 第33页 |
| ·乙烯对麦冬荧光特性影响的测定 | 第33页 |
| ·结果与分析 | 第33-39页 |
| ·麦冬的光响应曲线 | 第33-34页 |
| ·麦冬的CO_2响应曲线 | 第34页 |
| ·乙烯对麦冬光合速率的影响 | 第34-36页 |
| ·乙烯对麦冬各荧光参数影响的测定 | 第36-39页 |
| ·乙烯对麦冬最小初始荧光Fo的影响 | 第36页 |
| ·乙烯对麦冬光化学量子效率Fv/Fm的影响 | 第36-37页 |
| ·乙烯对麦冬Fv'/Fm'的影响 | 第37页 |
| ·乙烯对光系统PSⅡ实际光化学量子产量的影响 | 第37-38页 |
| ·乙烯对麦冬光化学猝灭系数的影响 | 第38页 |
| ·乙烯对麦冬NPQ的影响 | 第38-39页 |
| ·乙烯对麦冬ETR的影响 | 第39页 |
| ·结论与讨论 | 第39-42页 |
| ·植物激素对光合作用的影响 | 第40页 |
| ·生理节奏对光合速率的影响 | 第40-41页 |
| ·生长发育 | 第41-42页 |
| 3 麦冬乙烯诱导表达差减cDNA文库的构建 | 第42-64页 |
| ·材料与方法 | 第42-56页 |
| ·实验材料 | 第42页 |
| ·植物材料 | 第42页 |
| ·材料培养与处理 | 第42页 |
| ·实验试剂及测序 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-56页 |
| ·总RNA的提取和纯化 | 第42-45页 |
| ·Poly(A)RNA的分离 | 第45-46页 |
| ·抑制差减杂交 | 第46-53页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第53页 |
| ·正向差减cDNA的克隆 | 第53-54页 |
| ·差异筛选cDNA文库 | 第54-55页 |
| ·阳性克隆的测序和序列分析 | 第55-56页 |
| ·结果与分析 | 第56-62页 |
| ·麦冬RNA的提取及纯化 | 第56-58页 |
| ·麦冬mRNA的分离 | 第58页 |
| ·差减cDNA文库的构建 | 第58-60页 |
| ·酶切与接头连接效率分析 | 第58-59页 |
| ·差减效率分析 | 第59-60页 |
| ·差减cDNA文库的构建 | 第60页 |
| ·差异筛选差减cDNA文库 | 第60-61页 |
| ·探针的标记效率 | 第60-61页 |
| ·斑点杂交 | 第61页 |
| ·阳性克隆的测序与序列分析 | 第61-62页 |
| ·阳性克隆的测序 | 第61页 |
| ·EST序列分析 | 第61-62页 |
| ·结论与讨论 | 第62-64页 |
| ·植物总RNA的提取与纯化 | 第62-63页 |
| ·防止RNA酶的污染 | 第62页 |
| ·提取方法与试剂的选择 | 第62页 |
| ·多糖与杂蛋白的去除 | 第62页 |
| ·RNA沉淀剂的选择 | 第62-63页 |
| ·mRNA的分离 | 第63页 |
| ·差减cDNA文库的建立 | 第63页 |
| ·探针的标记 | 第63页 |
| ·SSH的应用 | 第63-64页 |
| 4 叶绿素结合蛋白基因与未知蛋白基因的克隆 | 第64-78页 |
| ·材料与方法 | 第64-69页 |
| ·实验材料 | 第64页 |
| ·植物材料 | 第64页 |
| ·材料培养与处理 | 第64页 |
| ·实验试剂 | 第64页 |
| ·实验方法 | 第64-69页 |
| ·麦冬总RNA的提取与纯化 | 第64页 |
| ·Poly(A)~+RNA的分离 | 第64页 |
| ·cDNA文库的构建 | 第64-68页 |
| ·CAB与UNP基因的获得 | 第68-69页 |
| ·CAB与UNP基因的序列分析与功能预测 | 第69页 |
| ·结果与分析 | 第69-77页 |
| ·全长cDNA文库的构建 | 第69页 |
| ·CAB基因与UNP基因全长序列的获得 | 第69-70页 |
| ·CAB基因序列分析与功能预测 | 第70-75页 |
| ·CAB基因开放阅读框(ORF)分析 | 第70-71页 |
| ·CAB基因BLAST分析 | 第71-72页 |
| ·CAB基因系统发育分析 | 第72页 |
| ·CAB基因编码蛋白的理化性质分析 | 第72-73页 |
| ·CAB基因编码蛋白的疏水性分析 | 第73页 |
| ·CAB基因编码蛋白的结构预测 | 第73-75页 |
| ·UNP基因的序列分析与功能预测 | 第75-77页 |
| ·UNP基因开放阅读框(ORF)分析 | 第75页 |
| ·UNP基因BLAST分析 | 第75-76页 |
| ·UNP基因系统发育分析 | 第76页 |
| ·UNP基因编码蛋白的理化性质分析 | 第76-77页 |
| ·UNP基因编码蛋白的疏水性分析 | 第77页 |
| ·讨论 | 第77-78页 |
| 5 表达载体构建与原核表达 | 第78-95页 |
| ·材料与方法 | 第78-85页 |
| ·材料 | 第78页 |
| ·限制性内切酶与常用生化试剂 | 第78页 |
| ·菌种和质粒 | 第78页 |
| ·方法 | 第78-85页 |
| ·正义、反义植物表达载体的构建 | 第78-82页 |
| ·表达载体导入农杆菌LBA4404 | 第82-83页 |
| ·原核表达载体构建 | 第83页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第83-84页 |
| ·SDS-PAGE所需试剂的配制 | 第84页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第84-85页 |
| ·结果与分析 | 第85-94页 |
| ·植物表达载体构建 | 第85-92页 |
| ·酶切位点的引入 | 第85-88页 |
| ·正、反义载体的构建 | 第88-90页 |
| ·正、反义表达载体导入农杆菌 | 第90-92页 |
| ·原核表达载体构建 | 第92页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第92-94页 |
| ·结论与讨论 | 第94-95页 |
| 6 结论与展望 | 第95-98页 |
| ·乙烯对麦光合作用的影响 | 第95页 |
| ·麦冬的光响应曲线与CO_2响应曲线 | 第95页 |
| ·乙烯对麦冬光合速率的影响 | 第95页 |
| ·乙烯对麦冬各荧光参数影响 | 第95页 |
| ·差减cDNA文库的构建 | 第95-96页 |
| ·麦冬总RNA的提取与mRNA的分离 | 第95页 |
| ·差减cDNA文库的构建 | 第95页 |
| ·差异筛选差减cDNA文库 | 第95-96页 |
| ·叶绿素A/B结合蛋白(CAB)基因的获得 | 第96页 |
| ·CAB基因的核甘酸序列分析 | 第96页 |
| ·CAB基因编码蛋白的分析及预测 | 第96页 |
| ·UNP基因的序列分析与功能预测 | 第96-97页 |
| ·UNP基因开放阅读框(ORF)分析 | 第96-97页 |
| ·UNP基因编码蛋白的分析 | 第97页 |
| ·表达载体构建与原核表达分析 | 第97页 |
| ·植物表达载体构建 | 第97页 |
| ·原核表达 | 第97页 |
| ·展望 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-110页 |
| 附录Ⅰ | 第110-128页 |
| 附录Ⅱ | 第128-134页 |
| 附录Ⅲ | 第134-136页 |
| 个人简介 | 第136-138页 |
| 导师简介 | 第138-140页 |
| 致谢 | 第140页 |
