| 第一部分 ERR促进Glucokinase表达的功能研究 | 第1-75页 |
| 中文摘要 | 第7-8页 |
| 英文摘要 | 第8-9页 |
| 前言 | 第9-12页 |
| 材料与方法 | 第12-22页 |
| 1.实验材料 | 第12-22页 |
| ·实验动物 | 第12页 |
| ·菌株和细胞株 | 第12页 |
| ·质粒载体 | 第12页 |
| ·工具酶及分子量标准 | 第12-13页 |
| ·引物序列 | 第13-14页 |
| ·试剂盒 | 第14-15页 |
| ·试剂 | 第15页 |
| ·主要仪器 | 第15-16页 |
| ·分析软件 | 第16-22页 |
| 实验方法 | 第22-45页 |
| 1 rGK启动子各片段和ERRE位点突变报告基因质粒载体的构建 | 第22-29页 |
| ·rGK启动子各片段的扩增 | 第22-23页 |
| ·rGK启动子的各个片段与pGL3-Basic质粒载体连接 | 第23-24页 |
| ·pGL3-Basic-mutERRE rGK(ERRE元件突变) | 第24-26页 |
| ·CaCl_2方法制备感受态细胞 | 第26-27页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌DH5α | 第27页 |
| ·克隆检测 | 第27页 |
| ·小量抽提质粒 | 第27-28页 |
| ·大量提纯质粒 | 第28-29页 |
| 2. 细胞培养 | 第29-31页 |
| ·细胞培养、复苏、传代、冻存 | 第29-30页 |
| ·细胞的瞬时转染 | 第30页 |
| ·大鼠肝原代细胞的分离及培养 | 第30-31页 |
| 3. 双荧光素酶报告系统测定启动子活性 | 第31页 |
| 4. 染色质免疫沉淀 | 第31-35页 |
| 5. Western Blotting | 第35-38页 |
| 6. GK活性测定 | 第38页 |
| 7. 核蛋白的提取 | 第38-39页 |
| 8. 电泳迁移率变动分析实验(EMSA) | 第39页 |
| 9. 重组腺病毒的操作方法 | 第39-42页 |
| 10. 细胞总RNA的提取 | 第42-43页 |
| 11. Real-Time PCR实验 | 第43-44页 |
| 12. 统计分析 | 第44-45页 |
| 实验结果 | 第45-65页 |
| 1. PGC-1α和ERRs(ERRα和ERRγ)共激活GK启动子的活性 | 第45页 |
| 2. 将ERRE元件进行突变后,PGC-1α和ERR共激活GK启动子的活性受到抑制 | 第45-46页 |
| 3. XCT790抑制PGC-1α和ERRα对GK启动子的激活作用,呈剂量依赖性 | 第46页 |
| 4. ERRγ通过ERRE结合于GK启动子 | 第46-47页 |
| 5. ERRs和PGC-1α可以促进GK mRNA的表达 | 第47页 |
| 6. 抑制剂XCT790可以抑制ERRα介导的GK的表达 | 第47-48页 |
| 7. ERRs和PGC-1α可以促进GK蛋白的表达 | 第48页 |
| 8. 在一定的时间范围内,胰岛素促进GKmRNA表达呈时间依赖性 | 第48页 |
| 9. 大鼠肝原代细胞中,抑制ERRα的表达,则胰岛素促进GKmRNA表达受到抑制 | 第48-49页 |
| 10. 大鼠肝原代细胞中,过表达Ad-ERRα或Ad-ERRγ,GK酶活性增强 | 第49-65页 |
| 讨论 | 第65-69页 |
| 小结 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-75页 |
| 第二部分 PGC-1β调节ALAS1及线粒体相关基因的启动子转录机制的初步探讨 | 第75-124页 |
| 中文摘要 | 第75-76页 |
| 英文摘要 | 第76-77页 |
| 前言 | 第77-79页 |
| 材料与方法 | 第79-103页 |
| 实验结果 | 第103-116页 |
| 1. PGC-1β/Foxa2促进ALAS1启动子的活性 | 第103页 |
| 2. PGC-1β通过NRF1启动子元件促进ALAS1启动子的活性 | 第103-104页 |
| 3. NRF1(1-304)显性负和RNAi抑制了PGC-1β对ALAS1启动子的激活作用 | 第104页 |
| 4. PGC-1β和NRF1相互作用的研究 | 第104页 |
| 5. PGC-1β通过NRF1促进了线粒体相关基因的mRNA表达 | 第104-105页 |
| 6. PGC-1β通过NRF1促进了线粒体ATP合成 | 第105-116页 |
| 讨论 | 第116-119页 |
| 小结 | 第119-120页 |
| 参考文献 | 第120-124页 |
| 附录 | 第124-125页 |
| 综述 | 第125-136页 |
| 致谢 | 第136页 |
