| 中文摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 文献综述 | 第11-23页 |
| 1.核盘菌及菌核病的研究 | 第11-17页 |
| ·菌核病的症状 | 第11页 |
| ·核盘菌的形态特征 | 第11-12页 |
| ·菌丝 | 第11页 |
| ·菌核 | 第11-12页 |
| ·子囊盘 | 第12页 |
| ·核盘菌的寄主范围 | 第12页 |
| ·核盘菌的侵染循环 | 第12-13页 |
| ·致病机理 | 第13页 |
| ·草酸的致病机理 | 第13页 |
| ·酶的致病机理 | 第13页 |
| ·菌核病的防治 | 第13-17页 |
| ·农业防治 | 第14页 |
| ·化学防治 | 第14页 |
| ·生物防治 | 第14-15页 |
| ·抗病品种的应用 | 第15-16页 |
| ·转基因工程方法 | 第16-17页 |
| 2 抗菌肽及其在植物抗病基因工程中的应用 | 第17-23页 |
| ·抗菌肽的分类 | 第17-19页 |
| ·防御素: | 第17页 |
| ·昆虫抗菌肽: | 第17-19页 |
| ·抗菌肽的理化特性 | 第19页 |
| ·抗菌肽的结构特征 | 第19-20页 |
| ·抗菌肽的作用机制 | 第20-21页 |
| ·抗菌作用机制 | 第20页 |
| ·抗病毒作用机制 | 第20页 |
| ·抗寄生虫作用机制 | 第20-21页 |
| ·抗肿瘤细胞及癌实体瘤的作用机制、 | 第21页 |
| ·应用前景 | 第21页 |
| ·抗菌肽的开发应用难点 | 第21-23页 |
| 引言 | 第23-25页 |
| 材料与方法 | 第25-41页 |
| 1 供试材料 | 第25页 |
| ·菌种和载体 | 第25页 |
| ·植物材料: | 第25页 |
| ·试剂 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25页 |
| ·仪器设备 | 第25页 |
| 2 试验方法 | 第25-41页 |
| ·Thanatin的融合植物表达载体的构建 | 第25-35页 |
| ·载体构建策略 | 第25-31页 |
| ·Thanatin基因串联体的构建 | 第31-34页 |
| ·Thanatin基因串联体植物表达载体的构建 | 第34-35页 |
| ·转基因油菜和拟南芥的获得及其菌核病抗性分析 | 第35-38页 |
| ·载体质粒转入农杆菌感受态细胞 | 第35页 |
| ·重组转化子的鉴定 | 第35页 |
| ·农杆菌的培养 | 第35-36页 |
| ·油菜转化 | 第36页 |
| ·拟南芥的种植、转化及转化植株的筛选 | 第36-37页 |
| ·转基因植株的PCR鉴定 | 第37页 |
| ·转基因油菜和拟南芥T_0代抗病性的初步测定 | 第37-38页 |
| ·Thanatin的亚细胞定位和原核表达 | 第38-41页 |
| ·构建SP-Thanatin与GFP融合基因。 | 第38-39页 |
| ·基因枪(PDS-1000/He)轰击洋葱表皮 | 第39页 |
| ·GFP绿色荧光观察 | 第39页 |
| ·Thanatin基因原核表达载体构建 | 第39页 |
| ·融合蛋白表达 | 第39-41页 |
| 结果与分析 | 第41-49页 |
| 1 Thanatin的融合植物表达载体的构建 | 第41-43页 |
| ·含Thanatin基因各片段的扩增 | 第41页 |
| ·SP-Thanatin和LP-Thanatin的TA克隆与鉴定 | 第41-42页 |
| ·Thanatin基因串联体的构建及鉴定 | 第42页 |
| ·Thanatin基因串联植物表达载体的构建及鉴定 | 第42-43页 |
| 2 转基因油菜和拟南芥的获得及其菌核病抗性分析 | 第43-46页 |
| ·转化子PCR鉴定 | 第43页 |
| ·油菜外植体的培养 | 第43页 |
| ·转基因油菜的获得 | 第43-44页 |
| ·转基因拟南芥的获得 | 第44页 |
| ·T_0代转基因植株PCR鉴定 | 第44-45页 |
| ·抗病性鉴定 | 第45-46页 |
| 3 Thanatin的亚细胞定位和原核表达 | 第46-49页 |
| ·载体的构建 | 第46-47页 |
| ·载体质粒的PCR鉴定 | 第47页 |
| ·Thanatin与GFP融合蛋白的亚细胞定位观察 | 第47-48页 |
| ·融合蛋白表达 | 第48-49页 |
| 讨论 | 第49-55页 |
| 1 Thanatin的融合植物表达载体的构建 | 第49页 |
| 2 转基因油菜和拟南芥的获得及其菌核病抗性分析 | 第49-52页 |
| ·农杆菌转化的机制 | 第49-50页 |
| ·转化受体的选择和影响因子 | 第50-51页 |
| ·试管苗的玻璃化现象 | 第51页 |
| ·关于拟南芥转化条件的优化 | 第51-52页 |
| ·抗性鉴定 | 第52页 |
| 3 Thanatin的亚细胞定位和原核表达 | 第52-55页 |
| ·Thanatin与GFP融合蛋白的亚细胞定位观察 | 第52-53页 |
| ·信号肽的应用 | 第53页 |
| ·Thanatin的原核表达 | 第53-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-66页 |
| 附录 | 第66-71页 |
| 附录A PFGC5941图谱 | 第66-67页 |
| 附录B PGEX-4T-1图谱 | 第67-68页 |
| 附录C PMD18-T图谱 | 第68-69页 |
| 附录D 缩略词表 | 第69页 |
| 附录E 主要化学试剂及缓冲液配制 | 第69-70页 |
| 附录F 培养基配方 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 作者简介 | 第72页 |
