中文摘要 | 第1-14页 |
ABSTRACT | 第14-19页 |
符号说明 | 第19-21页 |
本文关键基因功能简介 | 第21-22页 |
第一章 前言 | 第22-46页 |
·酿酒酵母高盐胁迫应答机制 | 第23-35页 |
·盐胁迫下渗透机制的调节 | 第23-27页 |
·盐胁迫下离子调控途径 | 第27-33页 |
·钙调磷酸酶(Calcineurin)信号途径 | 第27-29页 |
·TOR(Targets of rapamycin)信号途径 | 第29-30页 |
·盐胁迫离子应答通道蛋白 | 第30-33页 |
·ENA1p离子通道 | 第31-32页 |
·TRK1/2p离子转运系统 | 第32-33页 |
·盐胁迫下基因组转录应答模式 | 第33-35页 |
·酿酒酵母细胞凋亡 | 第35-39页 |
·酿酒酵母BDF1P转录因子研究进展 | 第39-44页 |
·Bromodomain结构域 | 第39-41页 |
·Bdf1p转录因子简介 | 第41-44页 |
·Bdf2p转录因子简介 | 第44页 |
·实验室前期工作 | 第44-45页 |
·本论文研究意义及主要内容 | 第45-46页 |
第二章 BDF1_P转录因子参与盐胁迫应答反应的遗传学分析 | 第46-64页 |
·引言 | 第46-47页 |
·材料与方法 | 第47-51页 |
·菌株 | 第47-48页 |
·主要试剂及仪器 | 第48页 |
·培养基 | 第48页 |
·微生物学技术 | 第48-49页 |
·菌体的生长 | 第48页 |
·菌种的保存 | 第48页 |
·梯度生长实验 | 第48-49页 |
·分子生物学方法 | 第49-51页 |
·酵母染色体的提取 | 第49页 |
·DNA浓度和纯度测定 | 第49页 |
·琼脂糖凝胶电泳 | 第49页 |
·PCR反应 | 第49-50页 |
·琼脂糖凝胶中DNA片段的回收 | 第50页 |
·酿酒酵母完整细胞转化法 | 第50页 |
·基因敲除 | 第50-51页 |
·实验结果与讨论 | 第51-63页 |
·BDF1基因与HOG-MAPK途径遗传学关系的研究 | 第51-54页 |
·hog1△bdf1△双缺菌株的构建 | 第51-53页 |
·LZ-105梯度生长实验 | 第53-54页 |
·BDF1基因与Calcineurin途径遗传学关系的研究 | 第54-57页 |
·bdf1△cmp1△cmp2△三缺菌株的构建 | 第54-55页 |
·LZ-139梯度生长实验 | 第55-57页 |
·BDF1基因与ENA1基因遗传学关系的研究 | 第57-59页 |
·ena1△bdf1△双缺菌株的构建 | 第57-58页 |
·LZ-107梯度生长实验 | 第58-59页 |
·BDF1基因与TRK1基因遗传学关系的研究 | 第59-63页 |
·trk1△bdf1△双缺菌株的构建 | 第59-62页 |
·TB02梯度生长实验 | 第62-63页 |
·本章小结 | 第63-64页 |
第三章 BDF1_P转录因子参与盐胁迫应答反应的转录组学分析 | 第64-91页 |
·引言 | 第64-65页 |
·材料与方法 | 第65-71页 |
·菌株 | 第65页 |
·培养基 | 第65页 |
·微生物学技术 | 第65-66页 |
·菌体的生长 | 第65页 |
·菌种的保存 | 第65-66页 |
·梯度生长实验 | 第66页 |
·酿酒酵母细胞体内甘油含量的测定 | 第66页 |
·分子生物学方法 | 第66-68页 |
·酵母染色体的提取 | 第66页 |
·DNA浓度和纯度测定 | 第66-67页 |
·琼脂糖凝胶电泳 | 第67页 |
·PCR反应 | 第67页 |
·琼脂糖凝胶中DNA片段的回收 | 第67页 |
·基因敲除 | 第67-68页 |
·酿酒酵母细胞盐处理 | 第68页 |
·基因芯片分析 | 第68-70页 |
·酵母总RNA提取 | 第68-69页 |
·酿酒酵母全基因组cDNA芯片 | 第69页 |
·RNA荧光标记 | 第69-70页 |
·芯片杂交与洗涤 | 第70页 |
·图像处理与数据分析 | 第70页 |
·实时定量RT-PCR验证分析 | 第70-71页 |
·实验结果与讨论 | 第71-90页 |
·酵母细胞的盐处理 | 第71页 |
·总RNA提取结果 | 第71-73页 |
·cDNA microarray芯片杂交结果 | 第73-86页 |
·芯片扫描及数据分析 | 第73-74页 |
·野生型菌株与bdf1△菌株盐胁迫转录谱中显著差异表达基因的分析 | 第74-80页 |
·甘油代谢相关基因 | 第75-76页 |
·海藻糖代谢相关基因 | 第76-77页 |
·离子通道蛋白 | 第77页 |
·氧化胁迫反应相关基因 | 第77-78页 |
·热休克蛋白 | 第78-79页 |
·功能未知基因 | 第79页 |
·其它功能基因 | 第79-80页 |
·BDF1基因缺失对酵母盐胁迫应答转录表达谱的影响 | 第80-86页 |
·实时定量RT-PCR | 第86-90页 |
·本章小结 | 第90-91页 |
第四章 BDF1_P转录因子与盐胁迫诱导的酵母细胞凋亡 | 第91-103页 |
·引言 | 第91-92页 |
·材料与方法 | 第92-95页 |
·菌株 | 第92页 |
·培养基 | 第92页 |
·微生物学技术 | 第92-93页 |
·菌体的生长 | 第92页 |
·菌种的保存 | 第92-93页 |
·酿酒酵母细胞盐处理 | 第93页 |
·线粒体膜电位(Mitochondrial membrane potential)的测定 | 第93页 |
·活性氧(reactive oxygen species,ROS)的测定 | 第93页 |
·粗酶液的制备 | 第93-94页 |
·超氧化物歧化酶(SOD)的酶活测定 | 第94页 |
·蛋白质含量的测定 | 第94页 |
·DAPI(4',6-diamidino-2-phenylindole)细胞核染色 | 第94页 |
·酵母细胞形态变化的透射电镜(TEM)观察 | 第94-95页 |
·实验结果与讨论 | 第95-102页 |
·BDF1基因缺失对酵母线粒体功能的影响 | 第95-100页 |
·酵母细胞线粒体膜电位的测定 | 第95-96页 |
·酵母胞内活性氧含量的测定 | 第96-100页 |
·酵母细胞凋亡特征的检测 | 第100-102页 |
·本章小结 | 第102-103页 |
全文总结 | 第103-104页 |
参考文献 | 第104-121页 |
附录 | 第121-127页 |
致谢 | 第127-128页 |
攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第128-129页 |
学位论文评阅及答辩情况表 | 第129-130页 |
外文论文 | 第130-161页 |
Ⅰ.Genetic and comparative transcriptome analysis of bromodomain factor 1 in the salt stress response of Saccharomyces cerevisiae | 第130-145页 |
Ⅱ.Characterisation of Bromodomain Factor 1 in the Yeast Salt Stress Response | 第145-161页 |