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酿酒酵母Bdf1p转录因子在高盐胁迫反应中调控机制的研究

中文摘要第1-14页
ABSTRACT第14-19页
符号说明第19-21页
本文关键基因功能简介第21-22页
第一章 前言第22-46页
   ·酿酒酵母高盐胁迫应答机制第23-35页
     ·盐胁迫下渗透机制的调节第23-27页
     ·盐胁迫下离子调控途径第27-33页
       ·钙调磷酸酶(Calcineurin)信号途径第27-29页
       ·TOR(Targets of rapamycin)信号途径第29-30页
       ·盐胁迫离子应答通道蛋白第30-33页
         ·ENA1p离子通道第31-32页
         ·TRK1/2p离子转运系统第32-33页
     ·盐胁迫下基因组转录应答模式第33-35页
   ·酿酒酵母细胞凋亡第35-39页
   ·酿酒酵母BDF1P转录因子研究进展第39-44页
     ·Bromodomain结构域第39-41页
     ·Bdf1p转录因子简介第41-44页
     ·Bdf2p转录因子简介第44页
   ·实验室前期工作第44-45页
   ·本论文研究意义及主要内容第45-46页
第二章 BDF1_P转录因子参与盐胁迫应答反应的遗传学分析第46-64页
   ·引言第46-47页
   ·材料与方法第47-51页
     ·菌株第47-48页
     ·主要试剂及仪器第48页
     ·培养基第48页
     ·微生物学技术第48-49页
       ·菌体的生长第48页
       ·菌种的保存第48页
       ·梯度生长实验第48-49页
     ·分子生物学方法第49-51页
       ·酵母染色体的提取第49页
       ·DNA浓度和纯度测定第49页
       ·琼脂糖凝胶电泳第49页
       ·PCR反应第49-50页
       ·琼脂糖凝胶中DNA片段的回收第50页
       ·酿酒酵母完整细胞转化法第50页
       ·基因敲除第50-51页
   ·实验结果与讨论第51-63页
     ·BDF1基因与HOG-MAPK途径遗传学关系的研究第51-54页
       ·hog1△bdf1△双缺菌株的构建第51-53页
       ·LZ-105梯度生长实验第53-54页
     ·BDF1基因与Calcineurin途径遗传学关系的研究第54-57页
       ·bdf1△cmp1△cmp2△三缺菌株的构建第54-55页
       ·LZ-139梯度生长实验第55-57页
     ·BDF1基因与ENA1基因遗传学关系的研究第57-59页
       ·ena1△bdf1△双缺菌株的构建第57-58页
       ·LZ-107梯度生长实验第58-59页
     ·BDF1基因与TRK1基因遗传学关系的研究第59-63页
       ·trk1△bdf1△双缺菌株的构建第59-62页
       ·TB02梯度生长实验第62-63页
   ·本章小结第63-64页
第三章 BDF1_P转录因子参与盐胁迫应答反应的转录组学分析第64-91页
   ·引言第64-65页
   ·材料与方法第65-71页
     ·菌株第65页
     ·培养基第65页
     ·微生物学技术第65-66页
       ·菌体的生长第65页
       ·菌种的保存第65-66页
       ·梯度生长实验第66页
       ·酿酒酵母细胞体内甘油含量的测定第66页
     ·分子生物学方法第66-68页
       ·酵母染色体的提取第66页
       ·DNA浓度和纯度测定第66-67页
       ·琼脂糖凝胶电泳第67页
       ·PCR反应第67页
       ·琼脂糖凝胶中DNA片段的回收第67页
       ·基因敲除第67-68页
     ·酿酒酵母细胞盐处理第68页
     ·基因芯片分析第68-70页
       ·酵母总RNA提取第68-69页
       ·酿酒酵母全基因组cDNA芯片第69页
       ·RNA荧光标记第69-70页
       ·芯片杂交与洗涤第70页
       ·图像处理与数据分析第70页
     ·实时定量RT-PCR验证分析第70-71页
   ·实验结果与讨论第71-90页
     ·酵母细胞的盐处理第71页
     ·总RNA提取结果第71-73页
     ·cDNA microarray芯片杂交结果第73-86页
       ·芯片扫描及数据分析第73-74页
       ·野生型菌株与bdf1△菌株盐胁迫转录谱中显著差异表达基因的分析第74-80页
         ·甘油代谢相关基因第75-76页
         ·海藻糖代谢相关基因第76-77页
         ·离子通道蛋白第77页
         ·氧化胁迫反应相关基因第77-78页
         ·热休克蛋白第78-79页
         ·功能未知基因第79页
         ·其它功能基因第79-80页
       ·BDF1基因缺失对酵母盐胁迫应答转录表达谱的影响第80-86页
     ·实时定量RT-PCR第86-90页
   ·本章小结第90-91页
第四章 BDF1_P转录因子与盐胁迫诱导的酵母细胞凋亡第91-103页
   ·引言第91-92页
   ·材料与方法第92-95页
     ·菌株第92页
     ·培养基第92页
     ·微生物学技术第92-93页
       ·菌体的生长第92页
       ·菌种的保存第92-93页
     ·酿酒酵母细胞盐处理第93页
     ·线粒体膜电位(Mitochondrial membrane potential)的测定第93页
     ·活性氧(reactive oxygen species,ROS)的测定第93页
     ·粗酶液的制备第93-94页
     ·超氧化物歧化酶(SOD)的酶活测定第94页
     ·蛋白质含量的测定第94页
     ·DAPI(4',6-diamidino-2-phenylindole)细胞核染色第94页
     ·酵母细胞形态变化的透射电镜(TEM)观察第94-95页
   ·实验结果与讨论第95-102页
     ·BDF1基因缺失对酵母线粒体功能的影响第95-100页
       ·酵母细胞线粒体膜电位的测定第95-96页
       ·酵母胞内活性氧含量的测定第96-100页
     ·酵母细胞凋亡特征的检测第100-102页
   ·本章小结第102-103页
全文总结第103-104页
参考文献第104-121页
附录第121-127页
致谢第127-128页
攻读学位期间发表的学术论文目录第128-129页
学位论文评阅及答辩情况表第129-130页
外文论文第130-161页
 Ⅰ.Genetic and comparative transcriptome analysis of bromodomain factor 1 in the salt stress response of Saccharomyces cerevisiae第130-145页
 Ⅱ.Characterisation of Bromodomain Factor 1 in the Yeast Salt Stress Response第145-161页

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