| 摘要 | 第1-5页 |
| Summary | 第5-8页 |
| 第一章 前言 | 第8-23页 |
| 一 猪繁殖与呼吸综合征研究进展 | 第8-18页 |
| 二 白细胞介素10的研究进展 | 第18-20页 |
| 三 白细胞介素17的研究进展 | 第20-21页 |
| 四、本研究的目的和意义 | 第21-23页 |
| 第二章 试验部分 | 第23-55页 |
| 第一节 材料与方法 | 第23-42页 |
| 一 实验技术路线 | 第23-24页 |
| 二 真核表达载体的构建 | 第24-37页 |
| 1 真核表达载体构建流程 | 第24-27页 |
| ·P-E体构建流程示意图 | 第24-25页 |
| ·P-RE-IL-10体构建流程示意图 | 第25-26页 |
| ·P-RE-IL-17体构建流程示意图 | 第26-27页 |
| 2 材料、仪器及试剂 | 第27-30页 |
| ·主要实验材料 | 第27页 |
| ·仪器 | 第27页 |
| ·制备感受态细胞用的试剂 | 第27页 |
| ·培养基的配制 | 第27-28页 |
| ·质粒提取试剂的配制 | 第28页 |
| ·引物 | 第28-30页 |
| 3 方法 | 第30-37页 |
| ·质粒PCR | 第30页 |
| ·电泳及PCR产物分析 | 第30-31页 |
| ·PCR产物胶回收 | 第31页 |
| ·连接 | 第31页 |
| ·DH5_a菌种的复苏 | 第31-32页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第32页 |
| ·转化 | 第32页 |
| ·抽提质粒 | 第32-33页 |
| ·对重组质粒pMD18-T-E、pMD18-T-RE、pMD18-T- IL-10、pMD18-T- IL-17双酶切鉴定 | 第33-34页 |
| ·对双酶切产物进行胶回收 | 第34页 |
| ·连接 | 第34页 |
| ·转化 | 第34页 |
| ·抽提质粒 | 第34-35页 |
| ·对pIRESneo-E、pIRESneo-RE-IL-10、pIRESneo-RE-IL-17双酶切鉴定和PCR鉴定 | 第35页 |
| ·阳性重组质粒的纯化 | 第35-37页 |
| 三 真核表达载体pIRESneo-E、pIRESneo-RE-IL-10、pIRESneo-RE-IL-17在BHK21细胞上的表达 | 第37-42页 |
| 1 材料及试剂、仪器 | 第37-39页 |
| ·材料与试剂 | 第37页 |
| ·仪器 | 第37页 |
| ·所用相关液体配制 | 第37-39页 |
| 2 方法 | 第39-42页 |
| ·细胞复苏 | 第39页 |
| ·细胞传代 | 第39页 |
| ·G418毒性敏感性检测 | 第39页 |
| ·脂质体Lipofectamine介导的重组质粒转染BHK21及抗性细胞的筛选 | 第39-40页 |
| ·冻存细胞 | 第40页 |
| ·间接免疫荧光抗体技术操作步骤 | 第40-42页 |
| 第二节 实验结果 | 第42-51页 |
| 1 目的基因的扩增 | 第42-43页 |
| 2 各基因片段的克隆 | 第43-45页 |
| 3 重组真核表达载体的构建 | 第45-47页 |
| 4 G418毒性敏感性检测 | 第47-48页 |
| 5 转染BHK21细胞及抗性细胞的筛选 | 第48-49页 |
| 6 间接免疫荧光检测基因表达产物 | 第49-51页 |
| 第三节 讨论 | 第51-54页 |
| 第四节 小结 | 第54-55页 |
| 主要参考文献 | 第55-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第64页 |
