| 缩略词说明 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-23页 |
| 1.1 研究背景 | 第12页 |
| 1.2 苹果砧木 | 第12-13页 |
| 1.3 苹果组织培养的研究进展 | 第13-16页 |
| 1.3.1 不同部位外植体对再生的影响 | 第13-14页 |
| 1.3.2 不同外植体的消毒方式对再生的影响 | 第14-15页 |
| 1.3.3 基本培养基对再生影响 | 第15页 |
| 1.3.4 培养环境对再生的影响 | 第15页 |
| 1.3.5 植物生长调节剂对再生的影响 | 第15-16页 |
| 1.4 植物遗传转化技术的研究进展 | 第16-20页 |
| 1.4.1 植物遗传转化发展历史 | 第16-17页 |
| 1.4.2 植物细胞全能性 | 第17页 |
| 1.4.3 体细胞胚胎的发生 | 第17-18页 |
| 1.4.4 植物转化的方法 | 第18-19页 |
| 1.4.5 农杆菌介导的遗传转化法 | 第19-20页 |
| 1.5 苹果遗传转化的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.6 WUSCHEL基因的研究分析 | 第21-22页 |
| 1.7 研究的目的与意义 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-26页 |
| 2.1.1 实验植物材料 | 第23页 |
| 2.1.2 表达载体与菌株 | 第23页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第23页 |
| 2.1.4 实验仪器与工具 | 第23页 |
| 2.1.5 培养基制备 | 第23-24页 |
| 2.1.6 感受态细胞的制备 | 第24-25页 |
| 2.1.6.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第24-25页 |
| 2.1.6.2 农杆菌感受态细胞的制备 | 第25页 |
| 2.1.7 引物序列 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-35页 |
| 2.2.1 ‘T337’叶片再生芽实验的设计 | 第26-27页 |
| 2.2.1.1 激素浓度对叶片再生芽影响的设计 | 第26页 |
| 2.2.1.2 暗培养时间对叶片再生芽影响的设计 | 第26页 |
| 2.2.1.3 不同着生节位叶片对叶片再生芽影响的设计 | 第26-27页 |
| 2.2.1.4 不同发育时期幼苗对叶片再生芽影响的设计 | 第27页 |
| 2.2.2 载体的构建 | 第27-33页 |
| 2.2.2.1 CTAB法提取‘T337’基因组 | 第27-28页 |
| 2.2.2.2 Trizon法提取植物RNA | 第28页 |
| 2.2.2.3 检测RNA的质量和浓度 | 第28页 |
| 2.2.2.4 反转录合成cDNA | 第28-29页 |
| 2.2.2.5 扩增目的基因 | 第29-30页 |
| 2.2.2.6 康为琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 | 第30页 |
| 2.2.2.7 康为高纯度提质粒试剂盒 | 第30-31页 |
| 2.2.2.8 大肠杆菌细胞的转化 | 第31-32页 |
| 2.2.2.9 目的片段和质粒的酶切、连接、转化 | 第32-33页 |
| 2.2.2.10 农杆菌的转化(冻融法) | 第33页 |
| 2.2.3 农杆菌介导的‘T337’遗传转化体系的建立 | 第33-35页 |
| 2.2.3.1 预培养对遗传转化影响的设计 | 第33页 |
| 2.2.3.2 菌液浓度对遗传转化影响的设计 | 第33页 |
| 2.2.3.3 侵染时间对遗传转化影响的设计 | 第33-34页 |
| 2.2.3.4 共培养时间对遗传转化影响的设计 | 第34页 |
| 2.2.3.5 叶片对抗生素敏感度的设计 | 第34页 |
| 2.2.3.6 转基因植株检测的设计 | 第34页 |
| 2.2.3.7 过表达植株表型观察设计 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-49页 |
| 3.1 ‘T337’叶片再生芽体系的建立 | 第35-40页 |
| 3.1.1 不同浓度的6-BA与NAA组合对叶片再生芽的影响 | 第35-36页 |
| 3.1.2 不同暗培养时间对叶片再生芽的影响 | 第36-37页 |
| 3.1.3 不同着生节位叶片对叶片再生芽的影响 | 第37-38页 |
| 3.1.4 不同发育时期幼苗叶片对叶片再生芽的影响 | 第38-39页 |
| 3.1.5 ‘T337’叶片再生芽的生物学宏观观察 | 第39-40页 |
| 3.2 MDWUS1转化‘T337’ | 第40-49页 |
| 3.2.1 载体的构建 | 第40页 |
| 3.2.2 预培养时间对转化效率的影响 | 第40页 |
| 3.2.3 农杆菌菌液浓度对转化效率的影响 | 第40-41页 |
| 3.2.4 侵染时间对转化效率的影响 | 第41-42页 |
| 3.2.5 共培养时间对转化效率的影响 | 第42-43页 |
| 3.2.6 抗生素敏感度实验 | 第43-45页 |
| 3.2.7 转基因植株的鉴定 | 第45-46页 |
| 3.2.8 过表达WUS1的‘T337’表型分析 | 第46-47页 |
| 3.2.9 转基因‘T337’的WUS1表达量分析 | 第47-49页 |
| 4 讨论 | 第49-51页 |
| 4.1 再生因素对‘T337’叶片再生芽的影响 | 第49页 |
| 4.2 转化因素‘T337’转化效率的影响 | 第49-50页 |
| 4.3 过表达MDWUS1对‘T337’叶片再生芽效率的影响 | 第50-51页 |
| 5 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
