| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 详细摘要 | 第6-22页 |
| 前言 | 第22-23页 |
| 第一部分 肝细胞核因子4α和肝细胞相关功能基因在不同肝细胞、肝肿瘤细胞及ES 细胞的表达 | 第23-33页 |
| ·材料与方法 | 第23-28页 |
| ·材料 | 第23-24页 |
| ·方法 | 第24-28页 |
| ·结果 | 第28-31页 |
| ·RT-PCR 检测人正常成熟肝细胞、人肝肿瘤细胞株以及人FLC 株HNF4α以及肝细胞相关功能基因的表达 | 第28页 |
| ·RT-PCR 检测小鼠不同发育阶段的FLC HNF4α以及肝细胞相关功能基因的表达 | 第28-31页 |
| ·讨论 | 第31-33页 |
| 第二部分 重组复制缺陷型腺病毒AdHNF4α构建 | 第33-46页 |
| ·材料与方法 | 第33-39页 |
| ·材料 | 第33-35页 |
| ·方法 | 第35-39页 |
| ·结果 | 第39-45页 |
| ·AdEasy~(TM)重组腺病毒系统 | 第39-41页 |
| ·获取HNF4α14256p cDNA 片段 | 第41页 |
| ·体外连接获取穿梭质粒pAdTrack-CMV-HNF4α | 第41页 |
| ·细菌内同源重组产生腺病毒质粒pAdHNF4α | 第41-42页 |
| ·293 细胞内包装、扩增腺病毒AdHNF4α | 第42-43页 |
| ·RT-PCR 法测定AdHNF4α上调L02 细胞中HNF4α表达 | 第43-44页 |
| ·Western blot 检测AdHNF4α上调L02 细胞中HNF4α表达 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| 第三部分 外源导入肝细胞核因子4α对人肝肿瘤细胞生物学特性的影响 | 第46-54页 |
| ·材料与方法 | 第46-49页 |
| ·材料 | 第46-47页 |
| ·方法 | 第47-49页 |
| ·结果 | 第49-52页 |
| ·AdHNF4α感染肝肿瘤细胞后HNF4α mRNA 和蛋白表达检测 | 第49-50页 |
| ·AdHNF4α感染肝肿瘤细胞后肝细胞相关功能基因表达测定 | 第50页 |
| ·AdHNF4α感染肝肿瘤细胞后细胞凋亡率的检测 | 第50-52页 |
| ·讨论 | 第52-54页 |
| 第四部分 外源导入肝细胞核因子4α对小鼠ES 细胞生物学特性的影响 | 第54-67页 |
| ·材料与方法 | 第54-58页 |
| ·材料 | 第54页 |
| ·方法 | 第54-58页 |
| ·结果 | 第58-64页 |
| ·PMEF 的制备 | 第58页 |
| ·小鼠ES 细胞株ES-D3 培养 | 第58页 |
| ·AdHNF4α感染小鼠ES 细胞后HNF4α表达测定 | 第58-59页 |
| ·ICC检测CK8、CK18、AFP和ALB表达 | 第59页 |
| ·RT-PCR检测ES细胞在分化过程中肝细胞相关功能基因表达 | 第59-62页 |
| ·PAS染色法检测糖原合成 | 第62页 |
| ·吲哚氰绿吸收染色实验 | 第62-64页 |
| ·讨论 | 第64-67页 |
| 第五部分 HNF4α基因修饰HepG2治疗小鼠急性肝功能衰竭的初步研究 | 第67-73页 |
| ·材料与方法 | 第67-69页 |
| ·材料 | 第67页 |
| ·方法 | 第67-69页 |
| ·结果 | 第69-71页 |
| ·小鼠生存率 | 第69页 |
| ·一般情况 | 第69页 |
| ·肝脏组织HE 染色 | 第69-70页 |
| ·血清学检查 | 第70-71页 |
| ·讨论 | 第71-73页 |
| 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 综述 | 第79-91页 |
| 硕士期间发表论文及获奖情况 | 第91页 |
| 硕士期间获奖情况 | 第91页 |
