| 独创性声明 | 第1页 |
| 论文使用授权的说明 | 第3-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第9-17页 |
| ·RGDV研究进展 | 第9-14页 |
| ·生物信息学研究进展 | 第14-16页 |
| ·本研究目的意义 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-30页 |
| ·实验材料 | 第17-19页 |
| ·供试病毒 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17页 |
| ·菌株与质粒 | 第17页 |
| ·实验动物 | 第17页 |
| ·实验仪器 | 第17-19页 |
| ·软件与工具 | 第19页 |
| ·实验方法 | 第19-30页 |
| ·RGDV双链RNA的抽提及纯化定量 | 第19-20页 |
| ·RGDV双链RNA的提取与纯化 | 第19-20页 |
| ·双链RNA的分析定量 | 第20页 |
| ·P8和Pns10基因的克隆 | 第20-24页 |
| ·ORF分析及可靠性检验 | 第20-21页 |
| ·P8和Pns10基因RT—PCR扩增 | 第21-22页 |
| ·克隆操作 | 第22-23页 |
| ·P8和Pns10基因的鉴定 | 第23-24页 |
| ·P8和Pns10蛋白功能分析 | 第24-25页 |
| ·蛋白质理化特性 | 第24-25页 |
| ·蛋白质结构功能域预测 | 第25页 |
| ·基序(Motif)搜索 | 第25页 |
| ·蛋白质结构预测 | 第25页 |
| ·呼肠孤病毒科的系统发育关系 | 第25-26页 |
| ·P8和Pns10融合蛋白在大肠杆菌中表达 | 第26-27页 |
| ·P8和Pns10原核表达载体的构建 | 第26-27页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第27页 |
| ·蛋白的SDS-PAGE电泳 | 第27页 |
| ·融合蛋白特异性抗血清的制备及Western blot鉴定 | 第27-30页 |
| ·融合蛋白抗血清的制备 | 第27-28页 |
| ·间接ELISA测定抗血清效价 | 第28页 |
| ·Western blot鉴定 | 第28-30页 |
| 3.结果与分析 | 第30-50页 |
| ·P8和Pns10基因的克隆及鉴定 | 第30-34页 |
| ·ORF分析及可靠性检验 | 第30-32页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第32页 |
| ·重组克隆质粒的筛选和鉴定 | 第32-33页 |
| ·序列测定及分析 | 第33-34页 |
| ·P8和Pns10蛋白功能分析 | 第34-41页 |
| ·蛋白质理化特性分析 | 第34页 |
| ·蛋白质结构功能域预测 | 第34-36页 |
| ·基序(Motif)搜索 | 第36-38页 |
| ·蛋白质结构预测 | 第38-41页 |
| ·呼肠孤病毒科的系统发育分析 | 第41-44页 |
| ·P8和Pns10的融合蛋白在大肠杆菌中表达 | 第44-48页 |
| ·P8和Pns10原核表达载体的构建 | 第44页 |
| ·重组质粒pGTP8、pGTPns10的酶切切鉴定 | 第44-46页 |
| ·蛋白的SDS-PAGE分析 | 第46-48页 |
| ·融合蛋白特异性抗血清的制备及Western blot鉴定 | 第48-50页 |
| ·间接ELISA法测定抗血清效价 | 第48页 |
| ·Western blot鉴定 | 第48-50页 |
| 4 讨论 | 第50-54页 |
| ·蛋白的结构特点与蛋白的表达特性 | 第50页 |
| ·蛋白结构与功能关系 | 第50-51页 |
| ·抗原决定簇预测 | 第51-52页 |
| ·呼肠孤病毒科的系统发育关系 | 第52-54页 |
| 小结 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 附录1 P8和Pns10基因核苷酸序列及氨基酸序列 | 第62-65页 |
| 附录2 P8和Pns10蛋白的理化性质 | 第65-66页 |
| 附录3 P8和Pns10蛋白二级结构预测 | 第66-69页 |
| 附录4 建树所用到的呼肠孤病毒科病毒及其GenBank登录号 | 第69页 |
