| 缩写词 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 文献综述 | 第11页 |
| 1 紫杉醇研究背景及现状 | 第11-17页 |
| ·红豆杉及紫杉醇概况 | 第11页 |
| ·紫杉醇研究进展 | 第11-16页 |
| ·紫杉醇合成途径及关键酶的分子生物学研究 | 第16-17页 |
| 2 目的基因的分离克隆技术 | 第17-19页 |
| ·基因芯片技术 | 第17-18页 |
| ·基因文库技术 | 第18页 |
| ·功能蛋白组技术 | 第18页 |
| ·mRNA差异显示技术 | 第18页 |
| ·图位克隆技术 | 第18-19页 |
| ·酵母双杂交技术 | 第19页 |
| ·生物信息学技术 | 第19页 |
| ·PCR技术 | 第19页 |
| 3 外源基因在原核系统中的表达与调控 | 第19-22页 |
| ·外源基因在大肠杆菌中表达的优化 | 第19-20页 |
| ·包涵体的形成及纯化 | 第20页 |
| ·包涵体的去折叠与复性研究 | 第20-21页 |
| ·重组蛋白的体外复性研究 | 第21-22页 |
| 研究背景 | 第22-23页 |
| 第一章 南方红豆杉苯丙氨酸CoA酰基转移酶基因的克隆 | 第23-31页 |
| 1 材料 | 第23页 |
| ·植物材料 | 第23页 |
| ·菌种及质粒 | 第23页 |
| ·试剂 | 第23页 |
| 2 方法 | 第23-27页 |
| ·红豆杉细胞总RNA的提取与鉴定 | 第23-24页 |
| ·反转录与聚合酶链式反应(RT-PCR) | 第24页 |
| ·RT-PCR产物的电泳鉴定及凝胶产物回收 | 第24-25页 |
| ·外源基因与T-载体的连接 | 第25页 |
| ·感受态大肠杆菌细胞的制备(CaCl_2法) | 第25-26页 |
| ·重组质粒对E.coliDH5α的转化(热激法) | 第26页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第26页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第26-27页 |
| ·测序及同源性比较 | 第27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-30页 |
| ·总RNA纯度及完整度的鉴定 | 第27页 |
| ·RT-PCR反应 | 第27-28页 |
| ·PCR产物与T-载体的连接、筛选及鉴定 | 第28-29页 |
| ·BAPT基因的测序分析 | 第29-30页 |
| 4 讨论 | 第30-31页 |
| 第二章 重组BAPT蛋白在原核系统中的表达 | 第31-40页 |
| 1 材料与试剂 | 第31页 |
| 2 方法 | 第31-35页 |
| ·原核表达系统pET-BAPT/BL21(DE_3)表达系统的构建 | 第31页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第31-32页 |
| ·SDS-PAGE | 第32页 |
| ·可溶性重组蛋白表达的优化 | 第32页 |
| ·重组BAPT蛋白的纯化 | 第32-33页 |
| ·兔抗BAPT血清的制备 | 第33-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-39页 |
| ·pET-BAPT／BL21(DE_3)的构建 | 第35-36页 |
| ·pET-BAPT／BL21(DE_3)总蛋白的诱导表达 | 第36-37页 |
| ·重组BAPT在大肠杆菌中的分布 | 第37页 |
| ·重组BAPT的纯化 | 第37-38页 |
| ·多克隆抗血清的制备 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-40页 |
| 第三章 重组BAPT的体外活性分析 | 第40-44页 |
| 1 材料 | 第40页 |
| ·材料与试剂 | 第40页 |
| ·仪器 | 第40页 |
| 2 方法 | 第40-41页 |
| ·可溶性重组蛋白的诱导表达 | 第40页 |
| ·包涵体的去折叠 | 第40-41页 |
| ·包涵体蛋白的亲和层析纯化 | 第41页 |
| ·包涵体蛋白的复性(透析复性法) | 第41页 |
| ·复性BAPT的检测 | 第41页 |
| 3 结果 | 第41-42页 |
| ·改变诱导条件和更换原核表达系统未能实现重组蛋白的可溶性表达 | 第41页 |
| ·包涵体蛋白的复性 | 第41页 |
| ·通过体外活性分析表明以上处理的重组BAPT未能表现出酶活性 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-51页 |
| 附录 | 第51-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 个人简历 | 第54页 |
