| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-16页 |
| 符号说明 | 第16-18页 |
| 前言 | 第18-22页 |
| 第一部分：构建肝癌eDNA文库，筛选和鉴定肝癌相关抗原的编码基因 | 第22-46页 |
| 材料和方法 | 第22-37页 |
| 1.材料 | 第22-23页 |
| 2.方法 | 第23-37页 |
| ·建立肝癌cDNA表达文库 | 第24-31页 |
| ·组织总RNA的提取 | 第24页 |
| ·mRNA的分离 | 第24-26页 |
| ·肝癌组织cDNA表达文库的构建 | 第26-30页 |
| ·文库的鉴定 | 第30-31页 |
| ·cDNA表达文库的血清筛选 | 第31-33页 |
| ·血清预处理 | 第31页 |
| ·第一轮筛库 | 第31-33页 |
| ·第二轮和第三轮筛库 | 第33页 |
| ·阳性克隆中的cDNA序列鉴定及生物信息学分析 | 第33-37页 |
| ·噬菌体的体内剪切 | 第33-34页 |
| ·噬菌粒的生成 | 第34-36页 |
| ·cDNA的测序与生物信息学分析 | 第36-37页 |
| 实验结果 | 第37-42页 |
| 1.肝癌cDNA文库的构建 | 第37页 |
| ·组织总RNA及mRNA的分离 | 第37页 |
| ·cDNA的合成和分离纯化 | 第37页 |
| ·cDNA的定量 | 第37页 |
| 2.肝癌cDNA表达文库的鉴定 | 第37页 |
| 3.肝癌cDNA表达文库的血清学筛选 | 第37页 |
| 4.阳性克隆中的cDNA序列鉴定 | 第37-38页 |
| 5.肝癌相关抗原分子的生物信息学分析及功能分类 | 第38-42页 |
| 讨论 | 第42-46页 |
| 1.肿瘤抗原的鉴定方法 | 第42-43页 |
| 2.SEREx方法所克隆到的抗原 | 第43-46页 |
| 第二部分：研究CT抗原CAGE在肝癌、胃癌和肠癌中的表达及其自然引发的抗体免疫应答 | 第46-57页 |
| 材料和方法 | 第46-53页 |
| 1.材料 | 第46-47页 |
| 2.方法 | 第47-53页 |
| ·RT一PCR | 第47-48页 |
| ·Western blotting分析CAGE抗原所引发的抗体反应 | 第48-53页 |
| ·CAGE重组蛋白的表达 | 第48-50页 |
| ·CAGE重组蛋白的纯化 | 第50-52页 |
| ·Westernblotting | 第52-53页 |
| 实验结果 | 第53-55页 |
| 1.CAGE基因在肝癌、胃癌和结直肠癌组织中的表达 | 第53页 |
| 2.肝癌、胃癌和结肠直肠癌患者对CAGE抗原的血清学反应 | 第53-55页 |
| 1) pQE31-CAGE表达重组子的构建 | 第53页 |
| 2) CAGE重组蛋白的表达与纯化 | 第53页 |
| 3) Western blotting结果 | 第53-55页 |
| 讨论 | 第55-57页 |
| 1.CT抗原CAGE在肝癌、胃癌和结肠直肠癌中的mRNA表达 | 第55页 |
| 2.CT抗原CAGE在肝癌、胃癌和结肠直肠癌患者体内所自然引发的体液免疫应答 | 第55-57页 |
| 总结 | 第57-58页 |
| 附图 | 第58-70页 |
| 参考文献 | 第70-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 博士在读期间所发表论文目录 | 第80-84页 |
| ABSTRACT | 第84-87页 |
| ABBREVIATION | 第87-89页 |
| PREFACE | 第89-92页 |
| PART ONE:Screening and identification HCC assoeiated antigen encoding genes MATERIALSANDMETHODS | 第92-113页 |
| 1. Materials | 第92页 |
| 2. Methods | 第92-106页 |
| ·Construction of the HCC cDNA library | 第92-101页 |
| ·Extraction of total RNA | 第92-93页 |
| ·Isolation of mRNA | 第93-94页 |
| ·Construction of HCC cDNA library | 第94-100页 |
| ·Evaluation of the cDNA library | 第100-101页 |
| ·Serological screening cDNA expression library | 第101-103页 |
| ·Preabsorption of the sera | 第101-102页 |
| ·The first round screening | 第102-103页 |
| ·The second round and third round screening | 第103页 |
| ·Identification of insert cDNA and bioinformatic analysis | 第103-106页 |
| ·In vivo excision of phages | 第103-104页 |
| ·Generation of phagemids | 第104-105页 |
| ·Sequencing of inserted cDNA and bioinformatic analysis | 第105-106页 |
| RESULTES | 第106-110页 |
| 1. Construction of the HCC cDNA library | 第106页 |
| ·Isolation of total RNA and Mrna | 第106页 |
| ·Synthesis and fractionation of the cDNA | 第106页 |
| ·Quantification of the cDNA | 第106页 |
| 2. Evaluation of the HCC cDNA library | 第106页 |
| 3. Serological screening HCC cDNA library | 第106页 |
| 4. Identification of the inserted cDNA | 第106页 |
| 5. Bioinformatic analysis of HCC associated antigens | 第106-110页 |
| DISCUSSION | 第110-113页 |
| 1. Tumor antigen identifying methods | 第110-111页 |
| 2. Tumor antigens identified by SEREX | 第111-113页 |
| PART TWO: Analysis of CAGE mRNA expression and natural humoral immune response elicited by CAGE antigen in HCC, gastric cancers and colorectal cancers | 第113-124页 |
| MTERIALS AND METHODS | 第113-120页 |
| 1. MATERIALS | 第113页 |
| 2. METHODS | 第113-120页 |
| ·Analysis of mRNA expression of CAGE gene by RT-PCR | 第113-115页 |
| ·Analysis of serological reactivity of CAGE antigen by Western blotting | 第115-120页 |
| ·Expression of recombinant CAGE protein | 第115-116页 |
| ·Purification of recombinant CAGE protein | 第116-118页 |
| ·Western blotting | 第118-120页 |
| RESULTS | 第120-122页 |
| 1. Expression of CAGE gene in HCC, gastric cancers and colorectal cancers | 第120页 |
| 2. Serological reactivity of CAGE antigen in HCC, gastric cancersvand colorectal cancers | 第120-122页 |
| 1) Construction of pOE31-CAGE recombinant | 第120页 |
| 2) Expression of recombinant CAGE protein | 第120页 |
| 3) Results of Western blotting | 第120-122页 |
| DISCUSSION | 第122-124页 |
| 1. CAGE mRNA expression in tumor entities | 第122页 |
| 2. The natural humoral immune response elicited by CAGE antigen in tumor entities | 第122-124页 |
| SUMMARY | 第124-125页 |
| APPENDIX | 第125-136页 |
| REFERENCE | 第136-144页 |
