| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-13页 |
| 论文 | 第13-38页 |
| 第一章 巴斯德毕赤酵母转化条件的优化 | 第13-23页 |
| 1.材料和方法 | 第13-19页 |
| ·材料 | 第13-15页 |
| ·菌株和质粒 | 第13页 |
| ·试剂 | 第13页 |
| ·其它试剂 | 第13-15页 |
| ·方法 | 第15-19页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第15页 |
| ·质粒载体pPIC3.SK的制备 | 第15-16页 |
| ·Pichia pastoris的转化 | 第16-18页 |
| ·转化子的验证 | 第18页 |
| ·转化条件的优化正交实验设计 | 第18-19页 |
| 2.结果与分析 | 第19-21页 |
| ·质粒载体pPIC3.5K的制备 | 第19-20页 |
| ·转化子的计数及转化效率的比较 | 第20页 |
| ·转化子的质粒提取和PCR验证 | 第20-21页 |
| 3.讨论 | 第21-23页 |
| ·电压对电击转化的影响 | 第21页 |
| ·细胞培养浓度对电击转化的影响 | 第21页 |
| ·DNA对电击转化的影响 | 第21-22页 |
| ·其它 | 第22-23页 |
| 第二章 载体pGAPZB-Ds64PHR的构建及其在巴斯德毕赤酵母中的转化 | 第23-31页 |
| 1.材料和方法 | 第23-27页 |
| ·材料 | 第23-24页 |
| ·菌株和质粒 | 第23页 |
| ·酶和试剂盒 | 第23页 |
| ·引物及测序 | 第23-24页 |
| ·试剂 | 第24页 |
| ·其它试剂 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-27页 |
| ·Ds64PHR基因编码框的获得 | 第24-25页 |
| ·载体pGAPZB-Ds64PHR的构建 | 第25-26页 |
| ·载体pGAPZB-Ds64PHR的富集 | 第26页 |
| ·表达载体和空载体的线性化 | 第26页 |
| ·表达载体转化至巴斯德毕赤酵母 | 第26页 |
| ·重组子的验证 | 第26-27页 |
| 2 结果与分析 | 第27-29页 |
| ·Ds64PHR基因编码框的获得 | 第27-28页 |
| ·表达载体pGAPZB-Ds64PHR的验证 | 第28页 |
| ·表达载体和空载体的线性化 | 第28页 |
| ·重组子的PCR验证结果 | 第28-29页 |
| 3.讨论 | 第29-31页 |
| 第三章 工程菌发酵Ds64PHR产物的能力测试及功能验证 | 第31-38页 |
| 1.材料和方法 | 第31-34页 |
| ·材料 | 第31-33页 |
| ·菌株 | 第31页 |
| ·酶和试剂盒 | 第31页 |
| ·试剂 | 第31-33页 |
| ·方法 | 第33-34页 |
| ·外源蛋白发酵条件的优化以及产物的获得 | 第33页 |
| ·SDS-PAGE进行蛋白质的表达水平测定 | 第33页 |
| ·工程菌GS115-Ds64PHR抗紫外能力的体内鉴定 | 第33-34页 |
| 2.结果与分析 | 第34-36页 |
| ·工程菌外源蛋白的SDS-PAGE电泳结果 | 第34页 |
| ·工程菌抗紫外能力的结果 | 第34-36页 |
| 3.讨论 | 第36-38页 |
| ·表达条件的优化 | 第36页 |
| ·外源蛋白Ds64PHR表达水平与抗紫外能力的关系 | 第36-38页 |
| 结论 | 第38-39页 |
| 声明 | 第39-40页 |
| 致谢 | 第40-41页 |
| 参考文献(1) | 第41-44页 |
| 在读期间科研成果 | 第44-45页 |
| 综述(一) | 第45-52页 |
| 参考文献(2) | 第52-55页 |
| 综述(二) | 第55-66页 |
| 参考文献(3) | 第66-68页 |
