乙肝表面抗原基因植物表达载体的构建及草莓再生体系建立
| 中文摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-24页 |
| 1 利用转基因植物生产口服疫苗的研究进展 | 第13-17页 |
| ·基本概念及原理 | 第13页 |
| ·转基因植物口服疫苗研究进展 | 第13-17页 |
| 2 转基因植物乙肝疫苗研究进展 | 第17-19页 |
| ·乙肝疫苗的免疫原理 | 第17-18页 |
| ·植物乙肝疫苗的研究进展 | 第18-19页 |
| 3 利用转基因草莓生产乙肝疫苗的可行性 | 第19-23页 |
| ·草莓的主要特性 | 第19-20页 |
| ·草莓生物技术研究进展及本研究的可行性 | 第20-23页 |
| 4 本研究的技术路线 | 第23-24页 |
| 材料与方法 | 第24-37页 |
| 1 材料 | 第24-26页 |
| ·试材 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24-25页 |
| ·主要试剂和药品 | 第25页 |
| ·所用几种培养基的成分 | 第25-26页 |
| 2 方法 | 第26-37页 |
| ·DNA的提取 | 第26-30页 |
| ·乙肝病毒DNA的提取 | 第26页 |
| ·大肠杆菌中质粒DNA的小量提取 | 第26-28页 |
| ·农杆菌双元载体中mini-Ti质粒的提取 | 第28-29页 |
| ·植物总DNA的提取 | 第29-30页 |
| ·PCR扩增 | 第30页 |
| ·DNA片段的回收 | 第30-31页 |
| ·限制性内切酶酶切反应 | 第31-32页 |
| ·连接反应 | 第32-33页 |
| ·PCR产物与T-载体的连接 | 第32页 |
| ·目的片段与载体片段的连接 | 第32-33页 |
| ·转化宿主细胞 | 第33-35页 |
| ·转化大肠杆菌DH5α | 第33-34页 |
| ·转化农杆菌 | 第34-35页 |
| ·蓝白斑筛选 | 第35页 |
| ·百脉根的转化 | 第35-37页 |
| ·培养基 | 第35-36页 |
| ·百脉根无菌系获得 | 第36页 |
| ·转化体系 | 第36-37页 |
| ·GUS基因组织化学染色法检测转化植株 | 第37页 |
| 结果与分析 | 第37-52页 |
| 1 目的基因的克隆 | 第37-41页 |
| ·乙肝病毒DNA的提取 | 第38页 |
| ·PCR引物设计 | 第38页 |
| ·PCP体系的优化 | 第38-39页 |
| ·PCR产物的回收 | 第39页 |
| ·目的片段与T-载体的连接 | 第39-40页 |
| ·重组子的鉴定 | 第40页 |
| ·DNA序列测定 | 第40-41页 |
| 2 植物表达载体的构建 | 第41-45页 |
| ·中间载体的构建 | 第43-44页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第44-45页 |
| 3 百脉根植物的转化 | 第45-50页 |
| ·百脉根转化系统的优化 | 第45-48页 |
| ·卡那霉素筛选压的确定 | 第45-46页 |
| ·工程菌液最佳浓度的选择 | 第46页 |
| ·共培养时间的掌握 | 第46-47页 |
| ·选择培养时间 | 第47-48页 |
| ·转化植株的GUS组织学鉴定 | 第48页 |
| ·农杆菌介导pBH转化百脉根 | 第48-50页 |
| ·工程菌的制备 | 第48-49页 |
| ·转化百脉根 | 第49-50页 |
| 4 草莓品种“森嘎拉”的叶片再生体系建立 | 第50-51页 |
| ·叶片无菌系的建立 | 第50页 |
| ·组培苗无性系的获得 | 第50-51页 |
| 5 讨论 | 第51-52页 |
| 小结 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 附录 | 第60-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
