目录 | 第1-6页 |
摘要 | 第6-8页 |
ABSTRACT | 第8-10页 |
前言 | 第10-12页 |
第一章 文献综述 | 第12-34页 |
1 微生物生态学研究方法进展 | 第12-21页 |
·荧光染料染色法 | 第12页 |
·BIOLOG GN微平板研究单一碳源底物利用能力 | 第12-13页 |
·生物标志法 | 第13-14页 |
·DNA熔解(解链)及复性分析 | 第14-15页 |
·PCR特异性扩增技术 | 第15-16页 |
·rRNA基因同源性分析方法 | 第16-18页 |
·核酸探针杂交技术 | 第18-19页 |
·变性梯度凝胶电泳 | 第19-20页 |
·荧光原位杂交方法 | 第20-21页 |
2 污染环境微生物分子生态学研究 | 第21-28页 |
·分子生态学技术在污染环境中的应用 | 第22-25页 |
·污染环境中微生物群落结构多样性 | 第22页 |
·污染环境微生物种群动态分析 | 第22-23页 |
·污染环境微生物适应性——质粒的分子生态效应 | 第23-24页 |
·降解基因的分子生态学 | 第24-25页 |
·微生物在污染环境中的分子生态效应 | 第25-28页 |
·调节噪声假说 | 第25-26页 |
·微生物对环境污染物获得适应性的途径 | 第26-28页 |
3 环境宏基因组研究 | 第28-31页 |
·环境细菌多样性 | 第28-29页 |
·建立宏基因组文库,寻求目标活性表达 | 第29-31页 |
·机遇与挑战 | 第31页 |
4 REP与ERIC序列 | 第31-34页 |
第二章 土壤宏基因组文库的构建 | 第34-50页 |
1 试验材料 | 第34页 |
2 试验方法 | 第34-43页 |
·土壤DNA的提取 | 第34-35页 |
·粗提DNA的纯化 | 第35-36页 |
·土壤DNA酶切体系的建立 | 第36页 |
·酶切片段回收与纯化 | 第36-37页 |
·质粒DNA的提取(碱裂解法) | 第37-38页 |
·载体脱磷 | 第38-39页 |
·酶连 | 第39-40页 |
·感受态细胞的制备 | 第40页 |
·转化 | 第40-41页 |
·电转化 | 第41-43页 |
·文库质量检查 | 第43页 |
·文库构建策略 | 第43页 |
3 结果与分析 | 第43-47页 |
·土壤总DNA的提取与纯化 | 第43-45页 |
·Sau3AI部分酶切和DNA片段的回收纯化 | 第45页 |
·质粒载体脱磷酸化效果验证 | 第45页 |
·外源片段插入效率的验证 | 第45-47页 |
·电转化效果 | 第47页 |
·电转化所建文库质量的检查 | 第47页 |
4 讨论 | 第47-50页 |
第三章 土壤微生物性状分子判别方法的初步建立 | 第50-59页 |
1 材料与方法 | 第50-51页 |
·菌株 | 第50页 |
·ERIC-PCR的引物序列 | 第50页 |
·总DNA提取 | 第50-51页 |
·PCR扩增条件 | 第51页 |
2 结果与分析 | 第51-57页 |
·对单菌总DNA进行ERIC-PCR扩增 | 第51-53页 |
·对混合微生物总DNA进行ERIC-PCR扩增 | 第53-54页 |
·对土壤总DNA进行ERIC-PCR扩增 | 第54-55页 |
·ERIC-PCR指纹图聚类分析 | 第55-57页 |
3 讨论 | 第57-59页 |
全文总结 | 第59-60页 |
参考文献 | 第60-70页 |
附录Ⅰ | 第70-71页 |
附录Ⅱ | 第71-72页 |
致谢 | 第72页 |