第一章 前言 | 第1-17页 |
1 研究背景 | 第11-12页 |
2 选题的依据及目的意义 | 第12-14页 |
3 实验技术路线 | 第14-15页 |
参考文献 | 第15-17页 |
第二章 文献综述 | 第17-48页 |
一 转基因昆虫技术的研究 | 第17-31页 |
1 转基因动物的研究概况 | 第17-18页 |
2 昆虫的转基因研究 | 第18-20页 |
3 昆虫的转基因技术 | 第20-31页 |
二 昆虫表达系统的应用研究 | 第31-33页 |
1 表达系统的分类及特点 | 第31-32页 |
2 昆虫载体表达系统 | 第32-33页 |
三 柞蚕丝素基因的研究概况 | 第33-38页 |
1 柞蚕简介 | 第33-34页 |
2 柞蚕丝素蛋白的合成、分泌及结构特点 | 第34-38页 |
四 转基因昆虫的研究前景及展望 | 第38-39页 |
参考文献 | 第39-48页 |
第三章 柞蚕丝素基因启动子区域的克隆与分析 | 第48-68页 |
一 实验材料 | 第48-49页 |
1 柞蚕品种 | 第48页 |
2 酶和试剂 | 第48-49页 |
3 载体、菌株和细胞 | 第49页 |
4 主要实验器材 | 第49页 |
二 实验方法 | 第49-54页 |
1 柞蚕丝素基因启动子区域的分离 | 第49-51页 |
2 柞蚕丝素基因转录起始位点的确定与分析 | 第51-52页 |
3 启动子区域的结构分析 | 第52-54页 |
三 结果与分析 | 第54-63页 |
1 柞蚕丝素基因5’端同源序列的克隆 | 第54-58页 |
2 柞蚕丝素基因转录起始位点的确定及分析 | 第58-60页 |
3 启动子功能区的分析 | 第60-63页 |
四 讨论 | 第63-66页 |
五 小结 | 第66页 |
参考文献 | 第66-68页 |
第四章 柞蚕丝素基因3’端片段的克隆与分析 | 第68-78页 |
一 实验材料 | 第69页 |
1 柞蚕品种 | 第69页 |
2 酶和试剂 | 第69页 |
3 载体和菌株 | 第69页 |
二 实验方法 | 第69-71页 |
1 柞蚕基因组DNA的提取 | 第69页 |
2 PCR引物的设计 | 第69-70页 |
3 柞蚕丝素基因3’端部分片段的克隆 | 第70-71页 |
三 结果与分析 | 第71-74页 |
1 PCR扩增及片段的克隆 | 第71-72页 |
2 克隆片段的碱基序列分析 | 第72-74页 |
3 克隆片段的氨基酸序列的分析 | 第74页 |
四 讨论 | 第74-76页 |
五 小结 | 第76页 |
参考文献 | 第76-78页 |
第五章 柞蚕丝素基因转移载体的构建及在不同昆虫细胞中的表达研究 | 第78-100页 |
一 实验材料 | 第79-80页 |
1 酶和试剂 | 第79-80页 |
2 昆虫细胞系: | 第80页 |
3 主要实验器材: | 第80页 |
4 载体和菌株 | 第80页 |
二 实验方法 | 第80-87页 |
1 DNA操作方法 | 第80-82页 |
2 引物设计 | 第82-83页 |
3 载体的构建策略 | 第83-85页 |
4 细胞转染实验 | 第85-86页 |
5 细胞总RNA的提取 | 第86页 |
6 Northern blot分析 | 第86-87页 |
三 实验结果与分析 | 第87-96页 |
1 柞蚕丝素基因转移表达载体的构建 | 第87-94页 |
2 柞蚕丝素基因转移载体在不同细胞系内的表达 | 第94-96页 |
四 讨论 | 第96-98页 |
五 小结 | 第98页 |
参考文献 | 第98-100页 |
第六章 利用同源重组将GFP导入柞蚕的研究 | 第100-128页 |
一 材料与方法 | 第101-105页 |
1 实验材料 | 第101页 |
2 实验方法 | 第101-105页 |
二 实验结果与分析 | 第105-116页 |
1 转基因蚕的调查 | 第105-108页 |
2 PCR检测 | 第108-111页 |
3 同源重组检测 | 第111-113页 |
4 Northern blot分析 | 第113-114页 |
5 Sourthern blot分析 | 第114-115页 |
6 荧光蛋白的检测及Western blot分析 | 第115-116页 |
三 讨论 | 第116-123页 |
1 外源基因的导入及后代分析 | 第117-120页 |
2 外源基因的同源重组及定向整合 | 第120-121页 |
3 载体构建及外源基因的表达 | 第121-123页 |
四 小结 | 第123-124页 |
参考文献 | 第124-128页 |
第七章 结论与展望 | 第128-132页 |
一 主要结论 | 第128-129页 |
二 本论文的创新之处 | 第129页 |
三 有待于进一步开展的工作 | 第129-130页 |
四 展望 | 第130-132页 |
附录 | 第132-134页 |
博士期间已发表或即将发表的论文及专利申请情况 | 第134-135页 |
致谢 | 第135-136页 |
个人简历 | 第136-137页 |