| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-27页 |
| ·细菌耐药性 | 第13-16页 |
| ·细菌耐药性现状 | 第13-14页 |
| ·金黄色葡萄球菌的耐药性现状 | 第14-15页 |
| ·细菌耐药性的产生机制 | 第15-16页 |
| ·新抗菌药物的研发 | 第16页 |
| ·分选酶的研究进展 | 第16-20页 |
| ·分选酶的种类及特性 | 第17页 |
| ·分选酶的结构 | 第17-18页 |
| ·分选酶的催化机制 | 第18-19页 |
| ·分选酶抑制剂的筛选 | 第19-20页 |
| ·分选酶的应用 | 第20-23页 |
| ·分选酶介导的表面展示 | 第20-21页 |
| ·重组蛋白的一步纯化 | 第21-22页 |
| ·蛋白质工程领域的应用 | 第22页 |
| ·作为一种新的融合标签 | 第22-23页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第23-24页 |
| ·GST融合表达系统 | 第24页 |
| ·本论文的研究背景、意义及研究内容 | 第24-27页 |
| ·研究背景及意义 | 第24-25页 |
| ·研究内容 | 第25-26页 |
| ·研究路线 | 第26-27页 |
| 第二章 重组表达载体pGEX-SrtA_(△N59)的构建 | 第27-40页 |
| ·材料 | 第27-29页 |
| ·菌株与质粒 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27-28页 |
| ·主要设备 | 第28页 |
| ·常用溶液的配制 | 第28-29页 |
| ·方法 | 第29-34页 |
| ·重组质粒pMD20-SrtA的提取及鉴定 | 第29-30页 |
| ·质粒pGEX-4T-1 的提取及酶切鉴定 | 第30-31页 |
| ·引物设计 | 第31-32页 |
| ·SrtA_(△N59)基因的扩增 | 第32页 |
| ·pGEX-4T-1 质粒及PCR产物的双酶切 | 第32-33页 |
| ·重组表达载体pGEX-SrtA_(△N59)的构建及鉴定 | 第33-34页 |
| ·结果 | 第34-38页 |
| ·重组质粒pMD20-SrtA的双酶切鉴定 | 第34-35页 |
| ·pGEX-4T-1 质粒的酶切鉴定 | 第35页 |
| ·SrtA_(△N59)基因的扩增 | 第35-36页 |
| ·重组质粒pGEX-SrtA_(△N59)的双酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·测序结果分析 | 第37-38页 |
| ·讨论与分析 | 第38-39页 |
| ·PCR引物的设计 | 第38页 |
| ·重组质粒pGEX-SrtA_(△N59)的构建 | 第38-39页 |
| ·本章小结 | 第39-40页 |
| 第三章 pGEX-SrtA_(△N59)在大肠杆菌中的诱导表达 | 第40-50页 |
| ·材料 | 第40-42页 |
| ·质粒与宿主菌 | 第40页 |
| ·主要试剂 | 第40-41页 |
| ·主要设备 | 第41页 |
| ·常用溶液的配制 | 第41-42页 |
| ·方法 | 第42-44页 |
| ·大肠杆菌BL21(DE3)感受态的制备 | 第42页 |
| ·重组质粒pGEX-SrtA_(△N59)的转化 | 第42页 |
| ·pGEX-SrtA_(△N59)的诱导表达 | 第42页 |
| ·蛋白样品的制备 | 第42-43页 |
| ·蛋白的SDS-PAGE检测 | 第43-44页 |
| ·pGEX-SrtA_(△N59)诱导表达条件的优化 | 第44页 |
| ·结果 | 第44-48页 |
| ·pGEX-SrtA_(△N59)的诱导表达 | 第44-46页 |
| ·pGEX-SrtA_(△N59)诱导表达条件的优化 | 第46-48页 |
| ·讨论与分析 | 第48-49页 |
| ·重组SrtA的可溶性表达 | 第48页 |
| ·SDS-PAGE检测蛋白分子量 | 第48-49页 |
| ·本章小结 | 第49-50页 |
| 第四章 GST-SrtA融合蛋白的纯化及活性测定 | 第50-61页 |
| ·材料 | 第50-52页 |
| ·菌株 | 第50页 |
| ·主要试剂 | 第50-51页 |
| ·主要设备 | 第51页 |
| ·常用培养基及溶液的配制 | 第51-52页 |
| ·方法 | 第52-54页 |
| ·重组菌BL21(DE3)/ pGEX-SrtA_(△N59)的诱导表达 | 第52页 |
| ·GST-SrtA_(△N59)融合蛋白的纯化 | 第52-53页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第53页 |
| ·分选酶底物的制备 | 第53-54页 |
| ·重组分选酶A的活性测定 | 第54页 |
| ·结果 | 第54-58页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第54-55页 |
| ·纯化后的蛋白浓度测定 | 第55-56页 |
| ·毕赤酵母GS115/pKFS-QALPETGEE-EGFP的诱导表达情况 | 第56-57页 |
| ·重组分选酶A的活性测定 | 第57-58页 |
| ·讨论与分析 | 第58-59页 |
| ·蛋白纯化 | 第58-59页 |
| ·展示在酵母表面的分选酶底物 | 第59页 |
| ·分选酶的活性测定 | 第59页 |
| ·本章小结 | 第59-61页 |
| 第五章 比较pGEX-SrtA_(△N59)与pET32a-SrtA_(△N59)表达的重组分选酶A的活性 | 第61-68页 |
| ·材料 | 第61-62页 |
| ·菌株 | 第61页 |
| ·主要试剂 | 第61页 |
| ·主要设备 | 第61-62页 |
| ·常用溶液的配制 | 第62页 |
| ·方法 | 第62-64页 |
| ·pET32a-SrtA_(△N59)的诱导表达 | 第62页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第62-63页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第63页 |
| ·重组分选酶A的活性测定 | 第63-64页 |
| ·结果 | 第64-66页 |
| ·pET32a-SrtA_(△N59)诱导表达的重组分选酶A的纯化 | 第64-65页 |
| ·pGEX-SrtA_(△N59)与pET32a-SrtA_(△N59)表达的重组分选酶A的活性比较 | 第65-66页 |
| ·讨论与分析 | 第66页 |
| ·本章小结 | 第66-68页 |
| 结论与展望 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-77页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 附件 | 第79页 |
