| 缩略词 | 第1-10页 |
| 中文摘要 | 第10-15页 |
| 英文摘要 | 第15-20页 |
| 前言 | 第20-24页 |
| 第一部分 恶性疟原虫乳酸脱氢酶重组表达质粒的构建及鉴定 | 第24-40页 |
| 材料和方法 | 第24-28页 |
| 一、 材料 | 第24页 |
| 二、 实验方法 | 第24-28页 |
| （一） 引物设计 | 第24-25页 |
| （二） 恶性疟原虫基因组DNA的提取 | 第25页 |
| （三） PCR扩增 | 第25页 |
| （四） LDHpf基因的克隆 | 第25-27页 |
| 1． 质粒DNA的制备及酶切 | 第25-26页 |
| 2． 目的基因片段LDH的纯化、酶切 | 第26页 |
| 3． 目的片断的分离和回收 | 第26页 |
| 4． 目的基因片断与载体的连接反应 | 第26页 |
| 5． 感受态细胞的制备 | 第26页 |
| 6． 转化 | 第26-27页 |
| （五） 重组克隆的筛选及鉴定 | 第27页 |
| 1． 初步鉴定 | 第27页 |
| 2． PCR鉴定 | 第27页 |
| 3． 酶切鉴定 | 第27页 |
| （六） LDHpf基因序列测定及同源性分析 | 第27-28页 |
| 结果 | 第28-37页 |
| 一、 LDH基因的扩增 | 第28页 |
| 二、 重组克隆的筛选及鉴定 | 第28-30页 |
| 三、 序列的测定及同源性分析 | 第30-37页 |
| 讨论 | 第37-39页 |
| 小结 | 第39-40页 |
| 第二部分 重组蛋白的表达、纯化及免疫原性研究 | 第40-53页 |
| 一、 材料 | 第40页 |
| 二、 实验方法 | 第40-43页 |
| （一） LDH基因的诱导表达 | 第40-41页 |
| （二） 表达产物SDS-PAGE分析 | 第41页 |
| （三） 表达产物酶活性测定 | 第41页 |
| （四） 表达产物的纯化 | 第41页 |
| （五） 表达产物抗原性分析 | 第41-43页 |
| 1． ELISA | 第41-42页 |
| 2． Western-blot | 第42页 |
| 3． 免疫血清的制备 | 第42页 |
| 4． 免疫血清的鉴定 | 第42-43页 |
| 结果 | 第43-50页 |
| 一、 重组质粒的表达 | 第43-46页 |
| （一） 表达条件的优化 | 第43-46页 |
| 1． 诱导时机 | 第43-44页 |
| 2． 诱导时间 | 第44页 |
| 3． 诱导剂浓度 | 第44-46页 |
| （二） 表达产物酶活性测定 | 第46页 |
| 二、 表达蛋白的纯化 | 第46-48页 |
| 三、 表达产物免疫学鉴定 | 第48-49页 |
| 四、 多抗制备及鉴定 | 第49-50页 |
| 讨论 | 第50-52页 |
| 小结 | 第52-53页 |
| 第三部分 单克隆抗体的制备及鉴定 | 第53-63页 |
| 一、 材料 | 第53页 |
| 二、 实验方法 | 第53-57页 |
| （一） 抗原制备 | 第53-54页 |
| （二） 动物免疫 | 第54页 |
| （三） 细胞融合 | 第54页 |
| （四） 阳性克隆的筛选与克隆化 | 第54页 |
| （五） 单克隆抗体的Ig类与亚类鉴定 | 第54-55页 |
| （六） 杂交瘤细胞的染色体分析 | 第55页 |
| （七） 诱生腹水 | 第55页 |
| （八） 效价测定 | 第55页 |
| （九） 单克隆抗体的SDS-PAGE分析 | 第55页 |
| （十） 单克隆抗体特异性鉴定 | 第55-57页 |
| 1． ELISA | 第55页 |
| 2． Dot-ELISA | 第55-56页 |
| 3． Western-blot | 第56-57页 |
| 结果 | 第57-61页 |
| 一、 杂交瘤细胞株的建立 | 第57页 |
| 二、 单克隆抗体的类及亚类 | 第57页 |
| 三、 单克隆抗体的效价 | 第57-58页 |
| 四、 染色体鉴定 | 第58页 |
| 五、 单克隆抗体的SDS-PAGE分析 | 第58页 |
| 六、 单克隆抗体特异性鉴定 | 第58-61页 |
| 讨论 | 第61-62页 |
| 小结 | 第62-63页 |
| 第四部分 疟疾的诊断研究 | 第63-91页 |
| 一、 材料 | 第63-65页 |
| 二、 实验方法 | 第65-70页 |
| （一） 镜检 | 第65页 |
| （二） PCR检测 | 第65-66页 |
| 1． 模板DNA制备 | 第65页 |
| 2． PCR反应 | 第65页 |
| 3． PCR产物的序列测定 | 第65-66页 |
| （三） ICT2检测 | 第66页 |
| 1． ICT2测试卡操作 | 第66页 |
| 2． 结果判定 | 第66页 |
| （四） 免疫胶体金层析检测 | 第66-68页 |
| 1． 单抗的纯化 | 第66页 |
| 2． 直径20～30nm胶体金的制备 | 第66-67页 |
| 3． 最适蛋白质浓度测定 | 第67页 |
| 4． 胶体金的标记 | 第67页 |
| 5． 免疫胶体金层析试纸条的制作 | 第67页 |
| 6． 反应模式的建立 | 第67-68页 |
| 7． 最低检测量的测定 | 第68页 |
| 8． 疟疾血样的检测 | 第68页 |
| 9． 稳定性检测 | 第68页 |
| （五） 酶活性检测 | 第68-69页 |
| 1． 电泳法 | 第68页 |
| 2． 酶比色法 | 第68-69页 |
| 2．1． 不同原虫感染率LDHpf活性的检测 | 第68-69页 |
| 2．2． 培养时间对LDHpf活性的影响 | 第69页 |
| 2．3． LDHpf活性用于监测药物疗效的初步研究 | 第69页 |
| （六） 免疫捕获LDH活性检测法 | 第69页 |
| （七） 数据处理 | 第69-70页 |
| 结果 | 第70-84页 |
| 一、 镜检 | 第70页 |
| 二、 PCR检测 | 第70-72页 |
| 三、 ICT2检测 | 第72-74页 |
| 四、 免疫胶体金层析法（GICA）检测 | 第74-79页 |
| （一） 单抗的纯化 | 第74页 |
| （二） 1ml胶体金的最适标记量的试验 | 第74-76页 |
| （三） 免疫胶体金层析法模式的建立 | 第76页 |
| （四） 最低检测量的测定 | 第76-77页 |
| （五） 疟疾血样检测 | 第77-78页 |
| （六） 稳定性测试 | 第78-79页 |
| 五、 LDH活性检测法 | 第79-82页 |
| （一） 电泳法 | 第79-81页 |
| （二） 酶比色法 | 第81-82页 |
| 1． 不同原虫感染率LDHpf活性的检测 | 第81页 |
| 2． 培养时间对LDHpf活性的影响 | 第81-82页 |
| 3． LDHpf活性用于监测药物疗效的初步研究 | 第82页 |
| 六、 免疫捕获LDH活性检测法 | 第82-84页 |
| 讨论 | 第84-90页 |
| 一、 PCR法 | 第84页 |
| 二、 免疫胶体金层析检测 | 第84-87页 |
| （一） ICT2检测 | 第85页 |
| （二） 以LDHpf单抗为基础的免疫胶体金层析法检测 | 第85-87页 |
| 三、 酶活性检测 | 第87-88页 |
| 四、 免疫捕获LDH活性检测法 | 第88-90页 |
| 小结 | 第90-91页 |
| 总结 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-101页 |
| 致谢 | 第101-102页 |
| 综述一 | 第102-107页 |
| 综述二 | 第107-113页 |
| 附录1： 博士期间论文发表情况 | 第113-115页 |
| 附录2： Genbank登录情况 | 第115-116页 |
