三种西瓜病毒的基因克隆及植物表达载体构建
| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 1 文献综述 | 第6-16页 |
| 1．1 西瓜病毒的研究概况 | 第6-7页 |
| 1．2 马铃薯Y病毒属的分子生物学 | 第7-9页 |
| 1．3 植物病毒外壳蛋白和复制酶介导的抗性 | 第9-16页 |
| 1．3．1 外壳蛋白介导的抗性 | 第10-12页 |
| 1．3．2 复制酶介导的抗性 | 第12-14页 |
| 1．3．3 复合基因介导的抗性 | 第14-16页 |
| 2 引言 | 第16-18页 |
| 3 材料与方法 | 第18-28页 |
| 3．1 材料 | 第18-19页 |
| 3．1．1 病毒 | 第18页 |
| 3．1．2 细菌菌株 | 第18页 |
| 3．1．3 质粒 | 第18页 |
| 3．1．4 酶和试剂 | 第18-19页 |
| 3．1．5 寡核苷酸引物 | 第19页 |
| 3．2 方法 | 第19-28页 |
| 3．2．1 繁殖毒源 | 第19-20页 |
| 3．2．2 病毒的粗提纯 | 第20页 |
| 3．2．3 病毒RNA的提取 | 第20页 |
| 3．2．4 RT-PCR | 第20-21页 |
| 3．2．5 PCR产物的抽提 | 第21-22页 |
| 3．2．6 目的DNA片段的回收纯化-液氮冻融法 | 第22页 |
| 3．2．7 质粒DNA的酶切和连接反应 | 第22页 |
| 3．2．8 DNA补平反应 | 第22-23页 |
| 3．2．9 转化大肠杆菌 | 第23页 |
| 3．2．10 重组克隆的筛选 | 第23-25页 |
| 3．2．11 质粒DNA的大量提取 | 第25-26页 |
| 3．2．12 DNA序列分析 | 第26-27页 |
| 3．2．13 转化根癌农杆菌 | 第27-28页 |
| 4 结果与分析 | 第28-40页 |
| 4．1 WMV-2的粗提纯 | 第28页 |
| 4．2 WMV-2 RNA的提取 | 第28-29页 |
| 4．3 WMV-2 CP基因的RT-PCR | 第29页 |
| 4．4 WMV-2 CP片段的克隆 | 第29-30页 |
| 4．5 WMV-2 CP片段的序列分析 | 第30-32页 |
| 4．6 双价植物表达载体pBZW-31的构建 | 第32-34页 |
| 4．6．1 单价植物表达载体的构建 | 第32-33页 |
| 4．6．2 中间载体的构建 | 第33-34页 |
| 4．6．3 双价植物表达载体的构建 | 第34页 |
| 4．7 三价植物表达载体的构建 | 第34-38页 |
| 4．7．1 中间载体的构建 | 第35-37页 |
| 4．7．2 单价植物表达载体的构建 | 第37页 |
| 4．7．3 双价植物表达载体的构建 | 第37-38页 |
| 4．7．4 三价植物表达载体的构建 | 第38页 |
| 4．8 转化根癌农杆菌 | 第38-40页 |
| 5 结论与讨论 | 第40-43页 |
| 5．1 WMV-2 CP片段的序列分析 | 第40页 |
| 5．2 本研究中载体的构建特点 | 第40-41页 |
| 5．3 转基因西瓜的安全性讨论 | 第41页 |
| 5．4 大载体和目的片段的平端连接 | 第41页 |
| 5．5 PCR检测 | 第41-42页 |
| 5．6 根癌农杆菌的转化 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-47页 |
| 英文摘要 | 第47-49页 |
| 附录： | 第49-51页 |
| 1 ABBREVIATION（缩略词） | 第49-50页 |
| 2 本论文构建的西瓜病毒基因有关载体 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51页 |
