| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-19页 |
| ·发展燃料酒精的意义和现状 | 第9-10页 |
| ·酒精与甘油的内在联系 | 第10-11页 |
| ·酒精与甘油在代谢途径中的联系 | 第10页 |
| ·酒精与甘油在呼吸链中的联系 | 第10-11页 |
| ·甘油合成途径中关键酶基因分析及其在发酵过程中的作用 | 第11-12页 |
| ·甘油合成途径中关键酶基因分析 | 第11-12页 |
| ·GPD 在酒精发酵过程中的作用 | 第12页 |
| ·基困敲除技术在工程菌构建中的应用 | 第12-15页 |
| ·基因敲除的操作步骤 | 第12-13页 |
| ·敲除策略的选择 | 第13-15页 |
| ·工业酵母菌和实验室酵母菌的差异 | 第15-16页 |
| ·阻断甘油的合成提高乙醇发酵产率的尝试 | 第16-17页 |
| ·阻断实验室酵母甘油合成途径的尝试 | 第16页 |
| ·阻断工业酵母甘油合成途径的尝试 | 第16-17页 |
| ·立题依据与意义 | 第17-18页 |
| ·研究内容 | 第18-19页 |
| 第二章 工业酒精酵母单倍体的获得 | 第19-27页 |
| ·材料 | 第19-20页 |
| ·菌种 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19页 |
| ·主要仪器 | 第19-20页 |
| ·培养基 | 第20页 |
| ·子囊孢子染色用试剂 | 第20页 |
| ·方法 | 第20-21页 |
| ·诱导孢子形成的方法 | 第20页 |
| ·孢子的分离和单倍体的制备 | 第20页 |
| ·单倍体的鉴定 | 第20页 |
| ·子囊孢子的染色观察 | 第20-21页 |
| ·单倍体的杂交 | 第21页 |
| ·菌株生长曲线的测定 | 第21页 |
| ·菌落形态 | 第21页 |
| ·巨大菌落形态 | 第21页 |
| ·结果 | 第21-26页 |
| ·高产孢率培养基的筛选 | 第21-22页 |
| ·单倍体的获得 | 第22页 |
| ·单倍体类型的区分 | 第22-23页 |
| ·单倍体交配型的确定 | 第23-24页 |
| ·单倍体基本性状的考察 | 第24-26页 |
| ·本章小结 | 第26-27页 |
| 第三章 GPD1 和GPD2 基因的敲除 | 第27-39页 |
| ·材料 | 第27-28页 |
| ·菌株与质粒 | 第27页 |
| ·培养基、工具酶和试剂 | 第27-28页 |
| ·主要仪器设备 | 第28页 |
| ·方法 | 第28-31页 |
| ·工业酿酒酵母染色体的提取 | 第28-29页 |
| ·工业酿酒酵母GPD1 基因的PCR 扩增 | 第29页 |
| ·大肠杆菌E. coli 感受态的制备及简易转化程序 | 第29-30页 |
| ·E.coli 质粒的快速提取 | 第30页 |
| ·质粒的大量提取 | 第30页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第30-31页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第31页 |
| ·工业酿酒酵母电穿孔转化法 | 第31页 |
| ·结果 | 第31-37页 |
| ·含有GPD1 同源基因的质粒构建 | 第31-34页 |
| ·含有GPD2 同源基因的质粒 | 第34页 |
| ·酵母的电击转化 | 第34页 |
| ·重组子的验证 | 第34-36页 |
| ·杂交方法敲除另一等位基因 | 第36-37页 |
| ·本章小结 | 第37-39页 |
| 第四章 重组酿酒酵母的发酵实验 | 第39-46页 |
| ·材料 | 第39页 |
| ·菌株与质粒 | 第39页 |
| ·培养基 | 第39页 |
| ·主要仪器设备 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-40页 |
| ·酒精发酵工艺 | 第39-40页 |
| ·生长量测定 | 第40页 |
| ·分析样品处理 | 第40页 |
| ·残糖及发酵产物的分析 | 第40页 |
| ·结果与讨论 | 第40-45页 |
| ·考察突变GPD1 基因的单倍体重组菌以葡萄糖底物中的发酵过程 | 第40-41页 |
| ·考察突变GPD2 基因的单倍体重组菌以葡萄糖底物中的发酵过程 | 第41-42页 |
| ·考察二倍体重组菌以葡萄糖底物中的发酵过程 | 第42-45页 |
| ·本章小结 | 第45-46页 |
| 结论与展望 | 第46-48页 |
| 一主要结论 | 第46页 |
| 二展望 | 第46-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第53页 |
