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拟南芥甘油二酯激酶(AtDGK7)基因抗逆生理功能研究

英文缩写符号及中英文对照表第1-9页
摘要第9-11页
ABSTRACT第11-14页
1 引言第14-26页
   ·DGK 的信号转导作用第14-22页
     ·DGK 家族第15-18页
     ·PLD 家族第18-19页
     ·PLD 和DGK 产生不同的PA第19-21页
     ·DGK 活性第21页
     ·PLC-DGK 与PLD 途径的交互作用及特异性第21-22页
   ·植物中DGK 的分子和生理学效应第22-24页
     ·伤胁迫后的AtDGK2第22页
     ·冷害和冻害条件下的DGK第22-23页
     ·外界激发子激活PLC-DGK 途径第23页
     ·cf-4/Avr4 病毒引起的分子效应第23页
     ·结瘤因子引起的分子效应第23-24页
   ·本研究的目的及意义第24-26页
2 材料与方法第26-45页
   ·试验材料与处理第26-27页
     ·植物材料第26页
     ·酶和试剂第26页
     ·菌株与质粒第26-27页
   ·实验方法第27-45页
     ·提取RNA 的材料收集第27页
     ·提取拟南芥总RNA第27页
     ·提取总RNA 后,去除基因组DNA第27-28页
     ·电泳检测RNA 是否降解步骤第28页
     ·RNA 反转录第28-29页
     ·拟南芥AtDGK7 基因的克隆及测序第29-34页
       ·PCR 扩增第29-31页
       ·大肠杆菌感受态细胞的制备第31页
       ·连接第31-32页
       ·转化及克隆筛选第32页
       ·碱法小量提取质粒DNA第32-33页
       ·酶切鉴定第33-34页
     ·表达载体的构建第34-37页
       ·碱法大量提取质粒DNA第34-36页
       ·载体构建第36-37页
     ·根癌农杆菌LBA4404 和GV3101 感受态细胞的制备及转化第37-40页
       ·农杆菌感受态细胞的制备第37页
       ·冻融法转化农杆菌第37-38页
       ·利用农杆菌介导转化拟南芥第38-40页
     ·转基因拟南芥植株的PCR 检测第40-42页
       ·SDS 小量法提取基因组第40-41页
       ·转基因拟南芥的种植培养第41页
       ·转基因植株的PCR 筛选第41-42页
     ·转基因拟南芥半定量RT-PCR 检测第42页
     ·半定量 RT-PCR 检测拟南芥中 P5CS1、P5CS2 和 RD29A 的表达第42-43页
     ·萌发试验第43页
     ·转基因拟南芥与野生型拟南芥在不同培养基上的根的伸长第43页
     ·生理指标的测定第43-45页
       ·脯氨酸含量的测定第43-44页
       ·丙二醛(MDA)含量的测定第44页
       ·SOD 活性的测定第44-45页
3 结果与分析第45-62页
   ·表达载体 pBI121 的构建第45-48页
     ·扩增AtDGK7 基因第45页
     ·克隆到pMD18-T 载体及酶切鉴定第45-46页
     ·构建植物表达载体 pBI121 及酶切鉴定第46-48页
   ·转基因植株的筛选及鉴定第48-51页
     ·硫酸卡那霉素抗性初筛第48-49页
     ·转基因拟南芥基因组水平鉴定第49-50页
     ·转基因拟南芥转录水平鉴定第50-51页
   ·转基因拟南芥与野生型拟南芥在不同处理下萌发率与生长情况统计第51-54页
     ·转基因拟南芥与野生型拟南芥根系生长情况的比较第51-52页
     ·转基因拟南芥与野生型拟南芥在ABA 培养基上的萌发率第52-54页
     ·盐胁迫处理条件下转基因拟南芥与野生型拟南芥生长情况比较第54页
   ·逆境胁迫相关基因表达模式的比较第54-57页
     ·胁迫相关基因的表达分析第54-56页
     ·水分胁迫相关基因的表达分析第56页
     ·ABA 相关基因的表达分析第56-57页
   ·转基因植株与野生型植株对低温胁迫的响应第57-60页
     ·低温条件下拟南芥生长情况比较第57-58页
     ·脯氨酸含量的变化第58-59页
     ·丙二醛含量和SOD 活性的变化第59-60页
   ·过表达 AtDGK7 转基因拟南芥的早花现象第60-62页
4 讨论第62-64页
5 结论第64-65页
参考文献第65-74页
致谢第74-75页
攻读硕士学位期间完成的论文第75页

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