| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 前言 | 第10-38页 |
| ·细菌耐药性的现状与新型抗生素研究的必要性 | 第10-11页 |
| ·QS 现象的提出和研究现状 | 第11-22页 |
| ·QS 与生物膜的关系 | 第22-23页 |
| ·以细菌群体感应系统为靶点的药物研究现状 | 第23-34页 |
| ·QS 拮抗物的筛选方法 | 第34-38页 |
| 1 菌株的筛选与鉴定 | 第38-46页 |
| ·试剂与仪器 | 第39-40页 |
| ·材料 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-41页 |
| ·唯一能源法初筛 | 第40页 |
| ·报告菌株法复筛 | 第40页 |
| ·菌株 AHL 分泌能力检测 | 第40页 |
| ·AHL 降解酶的酶活检测 | 第40-41页 |
| ·菌种鉴定 | 第41页 |
| ·结果 | 第41-45页 |
| ·产酶菌株的筛选 | 第41-43页 |
| ·酶活的检测 | 第43页 |
| ·菌株 A8 的菌种鉴定 | 第43-45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| 2 AHL 降解酶的克隆和表达 | 第46-65页 |
| ·材料 | 第46页 |
| ·菌株和质粒 | 第46页 |
| ·酶和主要试剂 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-53页 |
| ·基因组 DNA 的提取 | 第46-47页 |
| ·基因组 DNA 文库构建 | 第47-49页 |
| ·基因组 DNA 的限制型内切酶消化 | 第47-48页 |
| ·酶切片断与载体的连接、转化 | 第48-49页 |
| ·具有 AHL 降解活性的亚克隆的筛选 | 第49页 |
| ·活性片断的分析 | 第49页 |
| ·反向 PCR 扩增 ORF3 全序列 | 第49-50页 |
| ·AHL 降解酶的重组表达 | 第50-52页 |
| ·AHL 降解活性检测 | 第52页 |
| ·AQ1全长基因克隆 | 第52-53页 |
| ·结果 | 第53-63页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第53-54页 |
| ·基因组 DNA 条件酶切 | 第54页 |
| ·具有 AHL 降解活性的亚克隆的筛选 | 第54-56页 |
| ·序列分析 | 第56-58页 |
| ·ORF3 的重组表达 | 第58-59页 |
| ·ORF3 对 AHL 降解活性检测 | 第59-60页 |
| ·ORF3 全长基因克隆 | 第60-63页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| 3 A8 发酵液中群体感应抑制因子的分离、鉴定和活性分析 | 第65-81页 |
| ·材料、试剂与仪器 | 第65-66页 |
| ·材料 | 第65页 |
| ·试剂和仪器 | 第65-66页 |
| ·实验方法 | 第66-67页 |
| ·发酵培养 | 第66页 |
| ·活性物质的萃取 | 第66页 |
| ·活性物质的 HPLC 分析 | 第66页 |
| ·活性物质的纯化 | 第66-67页 |
| ·化合物结构的确定 | 第67页 |
| ·化合物活性测定 | 第67页 |
| ·结果 | 第67-79页 |
| ·发酵培养 | 第67页 |
| ·活性物质的萃取 | 第67-68页 |
| ·活性物质的 HPLC 分析 | 第68-69页 |
| ·活性物质的纯化 | 第69页 |
| ·化合物结构的确定 | 第69-79页 |
| ·化合物活性测定 | 第79页 |
| ·讨论 | 第79-81页 |
| 4 环肽的抗感染作用初步研究 | 第81-86页 |
| ·仪器 | 第81页 |
| ·实验方法 | 第81-83页 |
| ·环肽对P.aeruginosa PAO1生物膜形成的影响 | 第81页 |
| ·环肽对P.aeruginosa PAO1抗生素敏感性的影响 | 第81-82页 |
| ·环肽对金黄色葡萄球菌S.aureus RN4220生物膜形成的影响 | 第82页 |
| ·环肽对S.aureus RN4220抗生素敏感性的影响 | 第82页 |
| ·环肽CP2对其它革兰氏阳性菌生物膜形成的影响 | 第82-83页 |
| ·结果 | 第83-85页 |
| ·环肽对PAO1生物膜形成的影响 | 第83页 |
| ·环肽对PAO1抗生素敏感性的影响 | 第83-84页 |
| ·环肽对S.aureus RN4220生物膜形成的影响 | 第84页 |
| ·环肽对S.aureus RN4220抗生素敏感性的影响 | 第84-85页 |
| ·环肽CP2对其它革兰氏阳性菌生物膜形成的影响 | 第85页 |
| ·讨论 | 第85-86页 |
| 5 化合物 CP2 抑制 S. aureus RN4220 生物膜形成机理的初步研究 | 第86-95页 |
| ·仪器与试剂 | 第87页 |
| ·仪器 | 第87页 |
| ·试剂 | 第87页 |
| ·实验方法 | 第87-90页 |
| ·总RNA提取 | 第87-88页 |
| ·RNA反转录 | 第88页 |
| ·定量PCR分析 | 第88-89页 |
| ·环肽CP2对S.aureus RN4220生长过程中Hld基因表达的影响 | 第89-90页 |
| ·结果 | 第90-93页 |
| ·总RNA提取 | 第90页 |
| ·RNA反转录 | 第90页 |
| ·定量PCR分析 | 第90-92页 |
| ·环肽 CP2 对 S.aureus RN4220 生长过程中 Hld 基因表达的影响 | 第92-93页 |
| ·讨论 | 第93-95页 |
| 6 总结与展望 | 第95-96页 |
| 7 参考文献 | 第96-112页 |
| 致谢 | 第112页 |
